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利用CRISPR-Cas9系统定点突变猪MSTN基因的研究

文献类型： 会议论文

第一作者： ZHANG Dong-jie

作者： ZHANG Dong-jie 1 ; 张冬杰 1 ; LIU Di 1 ; 刘娣 1 ; ZHANG Xu 1 ; 张旭; WANG Liang; 汪亮; YANG Guo-wei;

作者机构： 1.黑龙江省农业科学院畜牧研究所 哈尔滨 150086

关键词： 突变猪;MSTN基因;基因定位;突变效率;基因组编辑工具

会议名称： 第七届中国畜牧科技论坛

主办单位： 中国畜牧兽医学会`中国农学会

页码： 00001391-00001397

摘要： 目的：CRISPR-Cas9系统是目前较为热门的一种基因组编辑工具,具有构建简单、成本低、适用范围广等优点,但同时也存在脱靶效率高,特异性差等缺点.为了今后能够有效的利用该系统进行基因功能研究、转基因动物培育等。 方法：本研究将带有绿色荧光蛋白(GFP)和肌肉生长抑制素基因(Myostatin,MSTN)靶序列的CRISPR-Cas9系统转染入PK15细胞系,利用流式细胞仪分离并收集转染成功的阳性细胞,使用PCR扩增结合克隆测序的方法检测和分析CRISPR-Cas9系统的定点突变情况,以评价CRISPR-Cas9系统的作用效果. 结果：结果发现,随机挑选的100个阳性克隆中,38个发生了变异,突变效率为38％,其中32个为插入突变,6个为缺失突变.插入突变中突变1(Mutation1)所占比例最高,为47.4％. 结论：本研究中CRISPR-Cas9系统的突变效率达到了38％,是目前进行基因组编辑的一个有效工具,推测其突变类型具有一定的偏好性.

分类号： S828.2

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