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表达番鸭细小病毒VP3基因重组鸡痘病毒转移载体的构建

文献类型： 会议论文

第一作者： Li Linlin

作者： Li Linlin 1 ; 李林林 1 ; 孙敏华 1 ; Sun Minhua 1 ; Dong Jiawen 2 ;

作者机构： 1.广东省农科院动物卫生研究所/广东省兽医公共卫生公共实验室/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室,广东 广州 510640

2.广东省农科院动物卫生研究所/

关键词： 番鸭细小病毒;VP3基因;重组鸡痘病毒;转移载体构建

会议名称： 第25届广东省科技进步活动月——畜牧兽医学术与科技创新发展大会

主办单位： 广东省畜牧兽医学会

页码： 00000016-00000023

摘要： 根据Genbank上痘病毒TK基因序列分别设计左右同源臂引物TKL-F/R和TKR-F/R,以FPV基因组为模板,扩增左右同源重组臂(TKL、TKR);PCR连接左右同源臂,使中间带有多酶切位点MCS,然后连入pBluescriptⅡSK(+)骨架质粒,获得的阳性质粒命名为pTK;合成反向串联表达盒:p7.5-MCS1-SV40-MCS2-P11,将表达盒插入质粒pTK的MCS位点,筛选获得阳性质粒pTKS;在鸡痘病毒早期启动子P7.5后的MCS1处插入MDPV VP3基因,晚期启动子P11后的MCS2处插入EGFP BGH pA,从而构建MDPV VP3基因重组鸡痘病毒转移载体pTKS-VP3-EGFP,对构建好的转移载体进行酶切和测序鉴定.将转移载体pTKS-VP3-EGFP转染鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)后,经RT-PCR和绿色荧光蛋白基因表达鉴定了MDPV VP3基因的表达,为进一步研制安全、高效的MDPV重组鸡痘病毒疫苗奠定了基础.

分类号： S858.32:S855.3

  • 相关文献

[1]表达番鸭细小病毒VP3基因重组鸡痘病毒转移载体的构建. 李林林,孙敏华,董嘉文,向蓉,袁建丰,邝瑞欢,胡奇林,张建峰. 2015

[2]番鸭细小病毒VP3基因和鸭IL-2基因真核融合表达载体的构建. 董嘉文,李林林,孙敏华,袁建丰,邝瑞欢,胡奇林. 2014

[3]鹅细小病毒VP3基因的克隆及表达. 孙敏华,董嘉文,李林林,袁建丰,邝瑞欢,胡奇林. 2013

[4]番鸭细小病毒和鹅细小病毒广东株VP1基因的克隆与序列分析. 季芳,张毓金,杨增岐,宋长绪. 2004

[5]番鸭细小病毒套式PCR检测方法的建立及应用. 李林林,董嘉文,孙敏华,袁建丰,邝瑞欢,胡奇林. 2013

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