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针对三种甘薯病毒的融合基因及其干涉载体

专利类型： 中国发明申请

专利权人： 河南省农业科学院

发明人： 张振臣;秦艳红;张德胜;张磊;乔奇;田雨婷;郑文明

专利号： CN201110079993.2

摘要： 本发明涉及一种针对三种甘薯病毒的融合基因及其干涉载体。针对三种甘薯病毒的融合基因序列为SEQ1，命名为SPFLG。其干涉载体构建时，先设计SPFLG-XbaI和SPFLG-SpeI以及SPFLG-KpnI和SPFLG-ClaI两对引物，将SPFLG基因克隆到T载体上，以SPFLG-T为模板，分别以两对引物进行PCR扩增，将获得的目的基因SPFLG分别用XbaI和SpeI及KpnI和ClaI酶切后，以反向重复的方式分别克隆到pBlueNiRIntron载体的内含子两侧；然后利用XbaI和KpnI进行双酶切，回收目的基因的片段，将其克隆到中间载体pROK219上；用EcoRI和HindIII酶切pROKSPFLG，回收包括35S启动子、反向重复片段和NOS终止子的目的片段，克隆到植物表达载体pBIN19上，命名为pBINSPFLG。试验表明，本发明构建的RNA干涉载体对SPFMV、SPLV和SPVG三种病毒有明显的干扰作用，为培育同时抗三种病毒的转基因甘薯奠定了基础。

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