文献类型： 获奖成果
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作者机构：
获奖名称： 科学技术奖
获奖等级： 二等奖
关键词： 花叶病;克隆;花叶病毒;草花;车前草花叶病毒;构建;车前;外源基因表达;花叶;表达研究;花;车前草;研究;长叶车前;基因;侵染;侵染性;基因表达;叶病;叶;侵染性克隆;外源基因;外源;表;表达;病毒侵染;病毒
第一完成单位： 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所
获奖时间： 2008
摘要： 虽然，植物病毒一直作为有害微生物予以对待，但能否作为有益微生物进行开发利用，造福于人类，是近年来各国植物病毒学家所关注并着手研究的热点。本成果于1997～2006年以长叶车前草花叶病毒上海分离物（RMV-Sh）为研究对象，在浙江省自然科学基金青年科技人才培养专项资金项目（RC9604）、国家杰出青年科学基金项目（30225031）资助下，在国际上较早开展植物病毒侵染性cDNA克隆构建和植物体内外源基因表达研究，并取得以下进展： 1．阐明RMV-Sh能侵染十字花科植物，在青菜上表现为沿脉轻微褪绿，在长叶车前草上表现为系统花叶，在心叶烟和显色藜等寄主上表现为局部枯斑。 2．首次测定RMV-Sh基因组由6301个核苷酸组成（登录号AF254924），基因组结构与烟草花叶病毒属其他成员类似，与同属侵染十字花科植物其他病毒相比，核苷酸和氨基酸序列同一性分别在80.0～95.9%和87.3～99.5%之间。并将目前已报道的11个能侵染十字花科植物的同属病毒分离物鉴定为RMV和芜菁明脉病毒（TuVCV）2个种。 3．应用分段PCR克隆连接法和长模板PCR一步扩增法构建了分别含有T7和35S启动子的RMV-Sh全长cDNA克隆。35S控制下全长cDNA克隆和T7控制下全长克隆体外转录产物摩擦接种心叶烟，均具有侵染性。免疫双扩散、电镜观察以及Western blot均能在接种叶片中检测到子代RMV-Sh粒子的存在。 4．通过重叠PCR技术将结核分支杆菌（简称MTB）31ku蛋白的一个抗原表位核苷酸序列插入到RMV-Sh全长cDNA克隆外壳蛋白基因的3'末端，成功构建了含有MTB抗原表位基因片段的侵染性克隆，所表现的枯斑症状与RMV-Sh所诱发的症状一致，经免疫电镜和Westerm blot等检测表明MTB抗原表位在植物中得到了表达。 这项研究成果在国际权威学术刊物上发表论文2篇，已被他引4次，为植物病毒基因功能研究提供了有效工具，也为植物体内生产基因药物提供了潜在载体。
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