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奶牛乙型肝炎病毒S基因克隆及诊断关键技术研究与应用

文献类型： 获奖成果

作者：

获奖名称： 科技进步奖

获奖等级： 三等奖

关键词： 乙型肝炎病毒;克隆;技术;乙型肝炎;关键技术;技术研究;奶牛;诊断;关键;肝炎病毒;奶;研究与应用;研究;基因克隆;基因;肝炎;牛;肝;病毒

第一完成单位： 贵州省畜牧兽医研究所

获奖时间： 2011

摘要： 一、项目来源与背景 1.项目来源： 贵州省优秀科技教育人才省长专项资金项目《奶牛HBV与人HBV基因序列同源性和新特异性诊断技术的研究》。贵州省重大科技专项《畜禽疫病快速诊断试剂盒的研究与开发》子项。 2.背景： HBV（乙型肝炎病毒）在我国发生率较高，对我国普通人群有很大的危害性。人HBV与奶牛HBV的关系受到医学界和兽医学界的广泛关注，液态奶、固态奶和其他奶制品与人类的关系很密切，它的安全性直接影响人类的身体健康，所以研究人HBV与奶牛HBV具有重要的公共卫生学和流行病学意义。 二、技术原理及性能指标 本项目首次克隆出奶牛HBV（乙型肝炎病毒）S基因片段序列，该序列被美国NCBI基因组数据库收录，GenBank登录号：GU395668。奶牛HBV S基因片段序列与GenBank中人HBV S基因片段序列进行比对，核苷酸序列相似性98.8﹪～99.4﹪，氨基酸序列相似性97.1﹪～98.3﹪。同时改良和建立了ELISA、荧光定量PCR、套式PCR 三种奶牛HBV快速、敏感、特异的诊断方法；应用ELISA、套式PCR、荧光定量PCR三种方法同时检测奶牛血清1220头份，其中ELISA诊断奶牛HBV HBsAg（表面抗原）阳性率为18.5﹪；荧光定量PCR诊断奶牛HBV阳性率为19.0﹪；套式PCR诊断奶牛HBV 阳性率为18.8﹪，进行了ELISA、荧光定量PCR、套式PCR三种检测结果的相关性探讨。构建pMD18-T-HBV-S重组质粒作为PCR的阳性模板，成功组装奶牛HBV PCR诊断试剂盒，共推广应用3451头份的中试产品。在省级以上刊物发表学术论文5篇。 三、技术的创造性与先进性 1.设计奶牛乙型肝炎病毒S基因引物经PCR扩增，首次克隆奶牛HBV S基因片段，并进行了序列测定，经与人的HBV S基因进行比对，核苷酸序列相似性为98.8﹪～99.4﹪，氨基酸序列相似性为97.1﹪～98.3﹪。该基因序列在NCBI数据库中为首次登载。 2.对奶牛HBV三种诊断方法进行了比较研究，首次研发组装奶牛乙型肝炎PCR快速诊断试剂盒，已申请国家发明专利并获受理。 3.“奶牛乙型肝炎PCR快速诊断试剂盒“在贵阳、遵义等地推广应用3451头份，该技术具有快速、敏感、特异等特点，推广应用前景良好。 四、应用情况 奶牛HBV PCR快速诊断试剂盒中试推广经济效益，课题组在2008年12月～2010年6月先后到乌当区、修文、花溪、贵阳三联乳业有限公司等地进行试剂盒推广应用，共推广应用3451头份的中试产品。

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