科研产出
siRNA介导的捻转血矛线虫Hc38基因沉默条件的优化
《中国兽医学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：将体外孵育的L3期幼虫分别在无血清和添加5%血清的生理盐水、PBS、EBSS(Earles balanced salt solution)中浸泡培养72h,根据L3期幼虫的生存状态确定最佳浸泡条件;然后分别用2.5%和5%的Lipofectamine 2000进行转染,根据转染效果确定转染试剂最佳浓度;最后分别用终浓度30,60,90,120nmol/L的siRNA浸泡24,48,72h,real-time PCR检测干扰效果,确定siRNA最佳浓度。结果表明,L3期幼虫在添加5%血清的EBSS中生存状态最好,采用5%的Lipofectamine 2000进行转染可以得到85%的转染效率,而用90nmol/L的siRNA浸泡72h,干扰效率可以达到85%以上。本研究对siRNA介导的捻转血矛线虫Hc38基因沉默条件进行了优化,为建立稳定的寄生虫功能基因沉默体系提供实验基础。
关键词： siRNA RNA干扰 捻转血矛线虫 Hc38基因
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SSR分子标记辅助选择棉花育性恢复基因Rf1
《新疆农业科学 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：[目的]借助分子手段对棉花育性恢复基因进行分子标记辅助选择.[方法]将胞质雄性不育恢复系383R与综合性状优良的早熟品系(轮回亲本)回交产生的BC3群体,利用与CMS恢复基因Rf1紧密连锁的2个EST-SSR标记进行分子检测,并展开分子标记辅助选择.[结果]Pop1 BC3中,11株标记基因型为隐性纯合型(rfrf),29株标记基因型为杂合型(Rfrf),20株标记基因型为显性纯和型(RfRf);Pop2BC3中,9株标记基因型为隐性纯合型(rfrf),33株标记基因型为杂合型(Rfrf),18株标记基因型为显性纯合型(RfRf).[结论]隐性纯合型(rfrf)植株表明这些植株中不含有恢复基因;杂合型(Rfrf)和纯合型(RfRf)植株为快速培育含有恢复基因的早熟品系提供基础.
关键词： 棉花 恢复基因Rf1 EST-SSR 分子标记辅助选择
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4SZ-3.0型收膜整地联合作业机的设计与试验
《甘肃农业大学学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：针对残膜对耕地造成严重的污染和危害问题,研究开发了一种适用于机械化回收残膜的收膜整地联合作业机,阐述了该机的结构特点及工作原理,并对影响残膜回收率和作业小时生产率的各因素进行了正交优化试验.结果表明:残膜回收率受捡膜滚筒转速影响最大,受机具前进速度和残膜输送叶轮转速影响较小;机具作业小时生产率受机具前进速度影响最大,受残膜输送叶轮转速和捡膜滚筒转速影响较小.当机具前进速度6km/h,捡膜滚筒转速110r/min,残膜输送叶轮转速200r/min时,当年残膜回收率为88%,作业小时生产率达到1.2hm2/h.
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牦牛源多杀性巴氏杆菌外膜蛋白OmpH和OmpA重组亚单位疫苗对小鼠的免疫效果
《中国兽医科学 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：为分析牦牛源多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)外膜蛋白H(OmpH)和外膜蛋白A(Om-pA)的免疫效果,构建了牦牛源多杀性巴氏杆菌OmpH和OmpA的原核表达载体pET-28a-OmpH和pET-28a-OmpA,表达并纯化重组外膜蛋白H(rOmpH)和重组外膜蛋白A(rOmpA),制备相应的单价疫苗和二价疫苗(rOmpH-A)以及全菌灭活疫苗,以PBS作为对照,皮下免疫小鼠。首免后每周采血1次,用间接ELISA检测抗体动态变化,并于三免后第9天用2LD50的分离菌株进行攻毒,比较保护力。结果,各试验组均能产生特异性抗体,全菌灭活组和rOmpA组小鼠的存活率分别为80%、40%,而rOmpH组、rOmpH-A组小鼠全部死亡,rOmpH和rOmpH-A组仅推迟小鼠死亡的时间,说明保护力微弱,不能抵抗同源菌株的致死性攻击。结果表明,rOmpA蛋白具有保护力,而rOmpH不具有保护力。
关键词： 牦牛 多杀性巴氏杆菌 ompA基因 ompH基因 重组蛋白
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PI3K/AKT信号通路调控Myogenin和MCK基因的表达
《遗传 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：骨骼肌分化过程受多个信号通路调控,PI3K/AKT信号通路是其中最重要的信号转导通路之一。PI3K/AKT信号通路可以调控骨骼肌分化,但在染色质水平上的调控机制还不是很清楚。文章以小鼠成肌细胞(C2C12)为研究材料,采用免疫印迹、染色质免疫共沉淀(Chromatin immunoprecipitation,ChIP)、定量PCR(Q-PCR)的方法研究PI3K/AKT信号通路调控Myogenin和MCK基因的表达。研究发现,C2C12细胞分化过程中添加PI3K/AKT信号通路激活剂处理24 h,Myogenin和MCK蛋白表达水平显著升高,组蛋白H3K27me3去甲基化酶UTX的表达也升高,H3K27me3在Myogenin基因启动子区和MCK基因启动子及增强子区的富集与对照组相比显著降低。用PI3K/AKT信号通路抑制剂处理,结果相反。因此,PI3K/AKT信号通路可能通过调控组蛋白去甲基化酶UTX的表达活性改变靶基因的H3K27me3的富集进而调控骨骼肌分化。
关键词： PI3K/AKT信号通路 Myogenin基因 MCK基因 UTX H3K27me3
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主要病毒性牛呼吸道疾病的研究进展
《中国畜牧兽医 》 2013 北大核心
摘要：牛呼吸道疾病(bovine respiratory disease,BRD)是引起舍饲牛发病和死亡的主要原因,给北美和世界养牛业造成巨大的经济损失。BRD是由多种病毒、细菌与外界环境相互作用,如应激、环境因素与多种病毒、细菌和支原体等而引起的一种严重的呼吸系统疾病。作者就引起BRD的常见和严重的病原牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)和牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus,BRSV)的生物学特性、细胞感染和致病机制等进行简要概述,以期为该病的防制和研究提供参考。
关键词： 牛疱疹病毒Ⅰ型 牛呼吸道合胞体病毒 牛呼吸道疾病 免疫抑制
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X染色体60149273位点在脂尾(臀)和瘦尾绵羊品种中的多态性及其基因定位
《中国农业科学 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：【目的】研究绵羊X染色体60149273位点在不同沉脂尾型绵羊品种中的多态性,为解析绵羊尾脂沉积性状的遗传机制提供基础数据。【方法】首先,采用PCR-SSCP分型方法检测X染色体60149273位点在不同脂尾类型绵羊品种的多态性,并借助PCR产物直接测序的方法确认各基因型相应序列,利用卡方检验的方法检测各基因型分布在不同品种中的平衡性。其次,利用生物信息方法将该SNP定位与绵羊androgen receptor(AR),并使用电子克隆的方法克隆出绵羊AR全长编码序列。同时以阿勒泰羊臀部脂肪RNA为材料,采用RT-PCR的方克隆绵羊AR第3—8外显子序列,利用生物信息学方法分析序列同源性以及序列的物种进化保守性。【结果】①PCR-SSCP结果显示,在脂尾(臀)型绵羊品种阿勒泰羊和湖羊群体中X染色体60149273位点未检出多态性,GG基因型占100%;而瘦尾(臀)型绵羊品种中国美利奴和萨福克羊群体中则出现了多态性,GG基因型分别下降至10%和21%。②利用比较基因组学首次电子克隆出该SNP所属基因AR的全长编码区,并从阿勒泰羊臀脂mRNA中成功扩增羊源AR第3—8外显子片段,测序结果与电子克隆序列完全一致。③物种同源性比对进一步显示,AR在哺乳类动物中高度保守,哺乳动物各物种间同源性高达90%;进化树分析结果显示,牛、绵羊、海豚和猪等哺乳动物亲缘较近。【结论】首次发现绵羊AR第3内含子一处SNP在脂尾(臀)与瘦尾绵羊品种中存在较大差异,该SNP将可作为一个分子标记运用于低脂绵羊新品种的培育,同时该SNP所属AR也可作为一个重要候选功能基因应用于绵羊尾(臀)脂沉积分子机制的相关研究。
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棉花3个脂肪酸碳链延长基因的cDNA克隆和表达分析
《中国农业科学 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：【目的】克隆棉花脂肪酸合成碳链延长的3个重要基因,分析它们的基因表达及其对逆境胁迫的反应,为棉花高油分育种和抗逆育种提供候选基因。【方法】采用同源克隆的方法,克隆陆地棉脂肪酸合成碳链延长3个重要基因GhKAR、GhHAD和GhENR的cDNA全长;应用生物信息学方法,分析克隆基因编码蛋白的特性;通过RT-PCR,分析目标基因的组织表达特征、时空表达水平和非生物胁迫条件下的表达特性。【结果】GhKAR和GhENR属于NADB Rosemann超基因家族,GhHAD属于hotdog超基因家族;GhKAR、GhHAD和GhENR的cDNA全长分别为1 119、906和1 318 bp,分别编码283、221、394个氨基酸;它们在根、茎、叶及胚珠发育不同时期均有表达。3个基因在高油材料中的基因表达水平都高于低油材料;20DPA(days post anthesis)到30DPA是高低油材料油分积累的主要时期,而30DPA到成熟期是高低油材料油分含量差距产生的关键时期。20DPA低油材料3个基因均有一个表达低值,高油材料基因表达量则持续升高;30DPA时表达量达到最高,其中,对于GhHAD和GhENR的表达量,棉花高油材料为低油材料2倍以上。不同非生物胁迫的诱导表达分析表明,GhKAR、GhHAD和GhENR都不同程度地受低温诱导,GhKAR和GhHAD在ABA诱导时上调表达,但都不受MeJA诱导表达;而GhENR在MeJA诱导2 h时上调表达,之后逐渐下调,受ABA诱导不明显。【结论】获得了GhKAR、GhHAD、GhENR 3个基因cDNA全长,通过基因表达特征分析,3个基因的表达可能对种子油分积累起着重要作用,同时在棉花抗逆方面也起一定的生理作用。
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绵羊发情周期不同组织Cry1 mRNA转录水平相对定量研究
《遗传 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：研究表明,时钟基因Cry1在哺乳动物季节性繁殖内分泌过程中可能发挥了重要作用。文章以多浪羊(非季节性繁殖)和中国美利奴羊(季节性繁殖)为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术对下丘脑-垂体-性腺轴主要组织Cry1在发情周期不同阶段的表达变化情况进行了跟踪检测。结果表明:绵羊Cry1在所检测组织中均有表达,其中松果体和甲状腺Cry1的表达水平较高;不同绵羊品种Cry1在发情周期不同阶段的组织表达谱基本一致,除下丘脑外,卵巢、子宫、松果体、垂体和甲状腺中Cry1的表达水平均是在发情前期达到峰值;卵巢、子宫、垂体和松果体Cry1在发情前期和发情期的表达变化幅度存在显著的品种间差异。研究结果表明:Cry1可能具有启动发情和季节性繁殖的重要作用。
关键词： Cry1基因 发情周期 下丘脑-垂体-性腺轴 绵羊
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滴灌条件下骏枣根系分布特征及根际土壤水分变化研究
《北方园艺 》 2013 北大核心
摘要：以7a生骏枣园为研究对象,分析了滴灌条件下骏枣根系分布特征和相同滴头流量不同滴灌时间沙地土壤水分动态的变化特征,以期为研究骏枣对水分的需求特性和提高沙地水分的利用率提供参考。结果表明:滴灌条件下骏枣的根系分布较浅,粗根的比例较大,细根较少,根系主要集中在20~40cm处,占总根系的55.51%;沙地骏枣成龄枣园的滴灌时间控制在24h左右,土壤中水分的富集区集中在50~60cm深处,含水量相对稳定且保持的时间较长,无渗漏,不影响更深层次土壤水分的上移,有利于骏枣根系的垂直生长及根系对水分的高效合理利用。
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