牛病毒性腹泻病毒巢式RT-PCR检测方法的建立及应用

韩猛立; 李娜; 黄新; 薄新文; 王新华; 赵玉龙; 钟发刚; 《西北农业学报 》 2010 北大核心 CSCD

摘要：参照多株不同基因型和基因亚型牛病毒性腹泻病毒(BVDV)5′UTR相对保守的基因序列,设计3对引物,其中1对能够扩增不同基因型BVDV 5′UTR片段(288 bp),另2对分别能够扩增BVDV-1型和BVDV-2型5′UTR片段(195 bp和116 bp)。扩增片段大小与预计片段一致。对PCR反应条件进行优化,建立了一种特异、敏感的RT-nPCR检测方法。敏感性试验表明,敏感性为10-2TCID50/mL。特异性试验表明,对猪瘟兔化弱毒疫苗株、牛轮状病毒、牛传染性鼻气管炎病毒的检测结果均为阴性。通过对新疆部分地区无BVD临床症状的牛场208份奶牛血样检测,阳性率为50.43%,表明该方法具有快速、简便、特异性强和灵敏度高等特点,可以作为BVDV隐性感染临床诊断的有效方法。

关键词： 牛病毒性腹泻病毒 RT-nPCR 检测 应用

 全文链接 请求原文

牛共刺激分子CD80和CD86实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

韩猛立; 何延华; 黄新; 宋天增; 薄新文; 钟发刚; 《中国兽医科学 》 2010 北大核心 CSCD

摘要：根据GenBank中牛CD80和CD86基因的序列,在保守区设计并合成各自的特异引物,并以牛3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)基因为内参,采用SYBR GreenⅠ染料以建立一种检测牛共刺激分子CD80和CD86的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。将CD80基因和CD86基因克隆至pMD18-T载体上,转化大肠杆菌DH5α,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线并进行熔解曲线分析以及灵敏性、特异性和重复性试验。结果表明,CD80基因、CD86基因和GAPDH基因的Ct值与标准品稀释度在1×102～1×108 copies/μL范围均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.991。熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰,特异性和重复性较好。证实,所建立的牛共刺激分子CD80和CD86荧光定量RT-PCR检测方法适用于临床样品的检测。

关键词： SYBR GreenⅠ 实时荧光定量聚合酶链反应 牛 CD80 CD86

 全文链接 请求原文

制备工艺对番茄皮膳食纤维理化性质的影响

郑刚; 郭小佩; 赵国华; 吴宏; 《食品科学 》 2010 北大核心 CSCD

摘要：以番茄酱加工剩余物番茄皮为原料,采用酸法、碱法、酸碱结合法和酶-酸法4种工艺制备番茄皮膳食纤维并对其理化性质进行分析。4种工艺中,酶-酸法工艺去除杂质效果最好,所得产品可溶性纤维含量最高(8.23%)、纯度最高(92.01%)、产品色泽最佳。4种方法制备的膳食纤维与原料在组成和理化性质上有很大差异。酸碱结合法和碱法制备的膳食纤维有较高的持水力(分别为8.74、7.85g/g)和膨胀力(分别为5.5、4.9mL/g),而酶-酸法和酸法制备的膳食纤维有较高的持油力(分别为5.91、5.49g/g)和吸附胆酸钠的能力(分别为329.4、297.3mg/g)。除酶-酸法外,其他方法制备的膳食纤维的阳离子交换能力均比原料高。

关键词： 番茄皮 膳食纤维 制备工艺 理化性质

 全文链接 请求原文

葡萄病毒B的RT-PCR检测技术研究

杨相昆; 田海燕; 牛建新; 王林; 代永欣; 《生物技术通报 》 2010 北大核心 CSCD

摘要：旨在建立适合葡萄的葡萄病毒B的RT-PCR检测技术。从感染葡萄病毒B的葡萄皮层中提取总RNA,以其为模板合成cDNA第一链,并利用两对引物分别进行PCR扩增;回收PCR特异扩增产物,与pUCm-T载体连接,并进行转化、重组克隆的筛选、重组质粒的酶切鉴定和序列测定。结果显示,两对引物均能获得与预期片段大小一致长约460 bp和470 bp的扩增产物扩增片段序列与已报道GVB序列(序列号:X75448)的核苷酸同源性均为81%,经反复多次试验证实,利用总RNA为模板合成cDNA并进行PCR扩增检测GVB是准确、可靠的。

关键词： 葡萄病毒B 检测 重组质粒 序列 同源性

 全文链接 请求原文

绵羊体外受精胚胎培养系统优化与囊胚差异染色

万鹏程; 石文艳; 周平; 代蓉; 石国庆; 刘守仁; 《新疆农业科学 》 2010 北大核心 CSCD

摘要：【目的】评定SOF和CR1培养系统对绵羊体外受精胚胎的发育的影响,筛选适合绵羊体外受精胚胎发育的培养体系,为相关试验研究提供一定的理论依据和研究基础。【方法】通过分析研究SOF和CR1两种培养系统在添加不同蛋白和血清成分时对绵羊体外受精胚胎发育的影响,并采用一种简化的差异染色方法,对SOFaaBSA和CR1aaBSA-FBS组培养液培养的绵羊扩张囊胚和孵化囊胚的总细胞数,滋养层细胞与内细胞团细胞数的组成和比例进行深入比较。【结果】SOFaaBSA和CR1aaBSA-FBS组的卵裂率、囊胚率和囊胚孵化率均高于其它实验组,但这两组之间差异不显著(P>0.05)。同时,SOFaaBSA组的扩张囊胚和孵化囊胚的总细胞数和滋养层细胞(TE)数均显著高于CR1aaBSA-FBS组(P<0.05),但内细胞团(ICM)数和ICM与TE细胞的比例在两组培养系统中均无显著差异(P>0.05)。【结论】CR1aaBSA-FBS培养液能够像SOFaaBSA培养液一样支持绵羊体外受精胚胎的发育,CR1培养系统可以用于绵羊体外受精胚胎的生产,但SOFaaBSA培养液相比较CR1aa BSA-FBS培养液而言更加适合绵羊体外受精胚胎的发育。

关键词： 绵羊 体外受精 差异染色

 全文链接 请求原文

血管内皮生长因子对体外成熟绵羊卵母细胞超微结构变化的影响

曹忻; 赵有璋; 罗海玲; 石国庆; 《畜牧兽医学报 》 2010 北大核心 CSCD

摘要：为研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对绵羊卵母细胞体外成熟过程中细胞超微结构变化的影响,根据前期研究结果,在绵羊卵母细胞体外成熟培养液(TCM199+BSA)中添加不同剂量的VEGF(对照组0 ng.mL-1和试验组5 ng.mL-1)进行成熟培养。利用透射电镜技术进行分析,研究结果显示:①VEGF加速了微绒毛的发育和变化,促进了微绒毛游离端斜行插入透明带,增加了细胞内外物质交流和养分的吸收;②VEGF对卵母细胞成熟过程中高尔基体的影响不显著;③发现特征性绵羊卵母细胞线粒体———带帽状线粒体,并且VEGF对线粒体的迁移有一定的促进作用;④VEGF的添加对绵羊卵母细胞体外成熟过程中脂滴数量的增加没有显著的作用,但VEGF减少了小脂滴聚集为大脂滴的数量。

关键词： 血管内皮生长因子 绵羊卵母细胞 体外成熟 超微结构

 全文链接 请求原文

新疆早熟棉品种SSR指纹图谱构建与品种鉴别

薛艳; 张新宇; 沙红; 李雪源; 孙杰; 李保成; 《棉花学报 》 2010 北大核心 CSCD

摘要：以新疆自1978年以来审定命名的42个早熟棉品种为材料,利用SSR分子标记对新疆早熟棉品种进行研究。从2300对SSR引物中筛选出了52对具有稳定多态性的引物,每对引物可检测到3～24个多态性片段,共检测到506个,平均9.7个,片段大小介于100～2000bp之间。对所得到的52个SSR指纹图谱进行组合和综合分析,用其中2对就可将所有供试品种区分开来。同时,分别对42个早熟棉品种进行指纹分析,获得各个品种的特异性指纹,可为今后棉花种子真伪快速鉴别奠定基础。

关键词： 陆地棉 SSR指纹图谱 品种鉴别

 全文链接 请求原文

北疆棉区杂交棉高产高效综合配套栽培技术

韩焕勇; 邓福军; 李保成; 林海; 余渝; 孔宪辉; 杨利勇; 《中国棉花 》 2010 北大核心

 全文链接 请求原文

棉花腺体性状基因的遗传与克隆研究进展

董承光; 王娟; 肖光顺; 李保成; 《中国农学通报 》 2010 北大核心

摘要：棉酚腺体是棉属植物特有的性状,发掘和利用控制腺体和棉酚合成的基因,对深入阐明棉酚的生物合成机理以及通过基因工程手段培育新型棉花品种具有重要的理论和现实意义。综述了近年来棉花棉酚腺体性状基因的遗传与克隆研究的最新进展,并对该研究中存在的问题进行分析和展望。

关键词： 棉酚腺体 遗传研究 生物合成

 全文链接 请求原文

播种密度对打瓜产量和生理参数的影响

张占琴; 战勇; 魏建军; 杨相昆; 《北方园艺 》 2010 北大核心

摘要：以打瓜为试材,研究播种密度对打瓜产量和相关生理参数的影响。结果表明:播种密度对产量、干物质积累、主要经济性状、叶面积指数、光合势都有着显著的影响。其中58 140株/hm2处理产量和干物质最高,单瓜经济性状没有达到最佳值,仍具有增产潜力。以46 515株/hm2产量居中,单瓜经济性状量高,但增产空间较小。

关键词： 打瓜 播种密度 产量 干物质 生理参数

 全文链接 请求原文