鲢生长激素cDNA表达载体构建及在大肠杆菌中的表达

陈松林; M.Schartl; 《水产学报 》 2002 北大核心 CSCD

摘要：应用RT—PCR技术从白鲢垂体mRNA中扩增出GH全长cDNA片段 ,长度 1.2kb。将 1.2kb白鲢GHcDNA克隆到载体质粒pBluescriptKSII +(pBSKSII +)中 ,构建了pBS -scGHcDNA克隆 ;通过含有NdeI酶切位点的特异引物扩增出不含信号肽序列的cDNA片段 ,将其重组到pRSET5b载体质粒中 ,构建了白鲢GHcDNA表达质粒pRSET -scGH。将此表达质粒转化BL2 1(DE3)大肠杆菌 ,经IPTG诱导后 ,在转化的大肠杆菌中检测到GH蛋白的存在。Western印迹表明该蛋白带与草鱼GH单克隆抗体具有强烈的免疫反应。

关键词： 鲢 生长激素cDNA 表达载体 大肠杆菌

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青鳉p53基因克隆、结构分析及同源重组载体构建

陈松林; HONG Yun-Han; Manfred SCHARTL; 《动物学报 》 2002 北大核心 CSCD

摘要：应用“Long PCR”技术 ,用 6对 p5 3引物从青胚胎干细胞基因组DNA中扩增出 6个相互重叠的片段 ,其中最大的片段长达 4 5kb ,这 6个PCR片段覆盖了整个 p5 3基因。序列分析表明青p5 3基因长约 8 7kb ,由 11个外显子和 10个内含子组成。结构比较表明 ,青 p5 3基因在大小上与人和小鼠 p5 3基因存在较大差异。青p5 3基因的内含子 1仅为 0 85kb ,而人和小鼠p5 3基因的内含子 1则分别长达 10kb和 6kb ;青 p5 3基因的外显子 3(86bp)明显大于人和小鼠 p5 3基因的外显子 3(2 2bp) ;外显子 4 (170bp)比人 (2 80bp)和小鼠 (2 6 0bp)的外显子 4小 ;内含子 10 (3 5kb)则比人和小鼠内含子 10 (0 7kb和 0 9kb)大得多。用SVTK neo基因作正选择标记基因 ,用SVTK tk基因作负选择标记基因 ,用青 p5 3基因组片段作同源序列 ,构建了鱼类 p5 3基因同源重组载体。将此载体转染青胚胎干细胞 ,并经G4 18和Ganc药物选择后证明上述正、负选择标记基因在干细胞中能够有效表达 ,并提供对G4 18的抗性和对Ganc的敏感性。

关键词： 青鳉 p53基因 结构 同源重组载体 胚胎干细胞

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蓄水塘养殖斑点叉尾Hui成鱼试验

刘志刚; 张春; 《淡水渔业 》 2002 北大核心

关键词： 蓄水塘 斑点叉尾Hui 成鱼养殖

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1种可用于检测WSSV蛋白酶的微量酶活测定技术

刘庆慧; 黄倢; 宋晓玲; 刘莉; 《中国水产科学 》 2002 北大核心 CSCD

摘要：以酪蛋白为底物 ,对常规蛋白酶检测方法进行改进并与偶氮酪蛋白法进行比较 ,建立适应病毒微量蛋白酶的快速检测方法。结果表明 ,改进的微量蛋白酶检测方法具有微量、快速、灵敏度高的特点 ,适于病毒微量蛋白酶的检测。蛋白酶的最低检出量可达ng级。

关键词： WSSV 微量测定 蛋白酶

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成鳖池套养黄颡鱼试验

刘志刚; 张春; 叶雄平; 程宝林; 《淡水渔业 》 2002 北大核心

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对虾抗病性状遗传标记的RAPD分析

刘萍; 孟宪红; 孔杰; 李健; 王伟继; 《水产学报 》 2002 北大核心 CSCD

摘要：对人工选育的第 3代中国对虾和选育的第 1代凡纳对虾进行个体人工感染WSSV后 ,选取感染WSSV十余天但仍健康的对虾为实验材料 ,用 2 2 0个随机引物进行RAPD分析 ,得到抗病性状相关的特异性遗传标记 99个。其中中国对虾抗病组特异性片段出现了 18个 ,片段大小在 46 0～ 2 30 5bp之间 ;凡纳对虾抗病组特异性片段产生 81个 ,片段大小在 435～ 2 2 87bp。 77个引物在两种对虾的抗病组扩增出特异性遗传标记 ,其中有 4个引物各获得了三个特异性片段 ,有 13个引物各获得了两个特异性片段 ,其余 6 1个引物各获得了 1个特异性片段。

关键词： 对虾 抗病性状 遗传标记 随机扩增多态DNA

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两种鲟半胱氨酸蛋白酶抑制剂成熟肽cDNA的克隆与分析

白俊杰; 劳海华; 叶星; 李英华; 罗建仁; 《动物学报 》 2002 北大核心 CSCD

关键词： 中华鲟 史氏鲟 半胱氨酸蛋白酶抑制剂 基因克隆

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草鱼线粒体细胞色素b基因的克隆与序列分析

叶星; 白俊杰; 劳海华; 简清; 罗建仁; 《中国水产科学 》 2002 北大核心 CSCD

摘要：用DNAExtractionKit提取草鱼(Ctenopharyngodonidella)肝脏的总DNA,合成特异引物,进行PCR扩增。扩增产物经琼脂糖电泳检测、纯化后克隆到pGEM Teasyvectorsystem的T载体上,筛选转化子,提取质粒,酶切鉴定。重组质粒序列测定的结果显示克隆了草鱼线粒体细胞色素b(cytb)基因1140个碱基及两侧部分序列共1254bp。用DNA分析软件VectorNTI6.0比较草鱼与GenBank中18种鱼类cytb的序列,显示草鱼与它们的cytb基因具有较高的同源性;根据草鱼与这18种鱼的cytb基因序列同源性所建立的进化树,与传统的分类地位基本吻合。

关键词： 草鱼 线粒体 细胞色素b 核酸序列

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罗氏沼虾肌肉白浊病病原研究

姜兰; 邓国成; 石存斌; 梁森汉; 郑重; 《水生生物学报 》 2002 北大核心 CSCD

摘要：从患白浊病的罗氏沼虾虾苗病灶分离到 1 0多株菌株 ,其中一株经人工感染证实为病原菌 ,经ATBExpression自动细菌鉴定仪测试 ,为木糖葡萄球菌 ,其主要特性为拟球状 (直径0 .8— 1 .1 μm) ,革兰氏阳性 ,无鞭毛 ,无荚膜 ,不产生芽孢 ,发酵葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖、海藻糖、阿拉伯糖、蔗糖及甘露醇产酸 ,β 半乳糖苷酶、过氧化氢酶及脲酶阳性 ,氧化酶、血浆凝固酶、V P反应、精氨酸双水解酶、鸟氨酸脱羧酶均为阴性。最适生长温度、盐度和pH值范围分别为 2 8— 37℃、0 %— 2 %、6— 9。对红霉素、卡那霉素、头孢氨苄及庆大霉素等药物敏感。

关键词： 罗氏沼虾 肌肉白浊病 病原 木糖葡萄球菌

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锦锂抗寒品系的选育

徐伟; 曹顶臣; 《淡水渔业 》 2002 北大核心

摘要：在黑龙江地区对日本锦锂进行富营养池塘的饲养成活率和自然环境的越冬成活率试验.结果表明越冬是制约锦锂在北方寒地池塘养殖的关键问题.采用日本锦锂与荷包红锂抗寒品系正反交,从正交组F1的锦锂型个体中选育出抗寒锦锂,1-3龄鱼饲养成活率分别为81%,89%和95%,越冬成活率分别为57%,86%和81%;F1锦锂型个体与日本原种锦锂回交F2,其饲养成活率和越冬成活率与F1锦锂型个体基本一致,且体型和体色都优于F1自交组,可以再通过连续几代的选育,从回交F2的锦锂型个体中筛选出遗传性状稳定的抗寒锦锂品系.

关键词： 抗寒品 锦鲤 杂交 选育 观赏鱼 北方地区 池塘养殖 越冬成活率

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