科研产出
超高效液相色谱-串联四级杆质谱联用法测定甘蔗中噻虫胺的残留
《热带作物学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：本研究建立了超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)法检测甘蔗中噻虫胺残留量的方法。甘蔗植株、茎秆及嫩稍样品经乙腈-水(V∶V=2∶1)提取,Envi-Carb复合PSA固相萃取小柱净化,ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱分离,电喷雾正离子源(ESI+)多反应监测(MRM)模式检测,外标法定量。结果表明:采用Envi-Carb固相萃取小柱,以乙腈为淋洗液,在小柱中添加PSA净化效果最好。在甘蔗植株、茎秆及嫩稍中分别添加0.04、0.4、1mg/kg噻虫胺,平均回收率为81.4%～109.1%,相对标准偏差(RSD)为0.9%～10.9%。该方法的最小检出量为0.4 ng,在甘蔗中的最低检出浓度(LOD)为0.04 mg/kg,能满足农药残留检测的要求。
关键词： 噻虫胺 甘蔗 残留 超高效液相色谱串联质谱
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海南50个甘蔗品种黄叶病毒的分子鉴定
《热带作物学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：为明确国家甘蔗体系集成示范及区试甘蔗品种在海南省被甘蔗黄叶病毒(SCYLV)侵染情况及病毒基因型类型,从集成示范及区试的50个甘蔗品种上采集带有显著病症或不显病症样品50份,采用特异引物通过RT-PCR方法进行甘蔗黄叶病毒检测和病毒基因型鉴定。结果表明:50个甘蔗品种中有31个被检测到SCYLV,检出率为62%;病毒基因型有古巴(CUP)基因型、巴西-秘鲁(BAR-PER)基因型和留尼汪岛(REU)基因型3种,主要以CUP基因型为主,占58.06%,其次是BAR-PER基因型,占51.61%,REU基因型最少,占29.03%;未发现CHN1、CHN2、CHN3基因型。另外,不同基因型混合侵染现象普遍存在,总混合侵染率达32.26%。可见,海南国家甘蔗体系集成示范及区试甘蔗品种严重感染甘蔗黄叶病毒(SCYLV),且存在不同基因型混合侵染,建议推广种植脱毒种苗来控制甘蔗黄叶病的发生。本研究为在海南蔗区推广和种植甘蔗脱毒种苗及抗病育种提供了理论支持。
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GA信号途径及其调控果树生长发育的研究进展
《果树学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：赤霉素(gibberellins,GAs)是一类重要的植物激素,参与调控植物生长发育的各个阶段,如种子的萌发、幼苗的生长、茎和根的生长及开花等过程。随着分子生物学及遗传学的发展,科学家已经逐步解析了GA在植物体内的信号转导过程及调控植物生长发育的机制。2017年以来,科学家在GA受体GID1的降解机制、DELLA新互作蛋白的鉴定以及O-fucosyltransferase修饰对GA信号的影响等多个方面均有重要发现,这些新成果大大扩展了人们对GA信号调控机制的认知。GA在果树育种中也发挥着重要作用,早在16世纪育种家就在葡萄中成功利用GA信号途径阻遏蛋白DELLA的功能获得型突变实现矮化育种,提高产量。近年来,又在多种果树中发现了GA途径基因突变造成的矮化材料。GA突变体在果树育种中的利用已证明,人为调控GA信号是实现果树高产稳产的有效方法。鉴于GA在植物生长发育及果树生产中的重要作用,笔者将对GA信号途径的最新研究进展及其在果树生产中的应用进行系统介绍,为将来在果树中更高效、更广泛地利用GA途径基因、提高果树产量及品质提供参考。
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秋石斛‘三亚阳光’Actin的克隆与表达模式分析
《热带作物学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：本研究克隆了秋石斛‘三亚阳光’(Dendrobium ‘Sonia Hiasakul’)肌动蛋白基因(DenActin)cDNA全长序列,并进行了DenActin进化地位和表达模式的分析。通过克隆获得的DenActin cDNA序列的全长为1 596 bp,其中开放阅读框为1 134 bp,编码377个氨基酸,同时通过gDNA克隆获得了DenActin 3′端的一段包含一个内含子的403 bp的片段。序列同源性分析发现该基因序列与GenBank中注册的其他植物Actin核苷酸序列的同源性均在85%以上,氨基酸序列的同源性高达97%以上。通过最大似然法构建其系统进化树,分析发现DenActin与黄石斛Actin的亲缘关系最为密切,并与其他兰科植物归为一大类。半定量PCR分析表明,DenActin在幼苗叶片和中苗茎尖、根、叶片以及成熟植株的茎、根、叶片、花柄、1 mm花苞、3 mm花苞、5 mm花苞、9 mm花苞中均稳定表达。秋石斛DenActin的克隆和表达模式分析为秋石斛功能基因的表达分析提供了候选的内参基因,而3′端包含内含子的gDNA片段的克隆为避免实时定量分析中的gDNA污染提供了引物设计的便利。
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降香黄檀和海南黄檀的鉴别
《分子植物育种 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：为了准确识别降香黄檀和海南黄檀的植株、苗木、木材和药材,采用形态学、木材解剖学、化学特征(薄层色谱TLC)、分子分析的方式对二者进行了较全面地归纳、整理和比较。结果表明,降香黄檀与海南黄檀的区别明显,其植株形态特征主要表现在前者雄蕊为9枚,单体,而后者为10枚,呈(5+5)的二体。木材特征主要表现在降香黄檀的心材和边材区别明显,木材具特殊的降香气味,心材灰烬呈灰白色,散孔材至半环孔材,傍管型以翼状、聚翼状为主,离管型为极小的带状,单列木射线稍多,多数宽2细胞,而海南黄檀的心材和边材无明显区别,木材无特殊香气,心材灰烬呈黄褐色,散孔材,傍管、离管相互连接,形成明显整齐的带状,单列木射线几无,多数宽3细胞。薄层色谱分析结果表明,根据不同Rf值的显色条带可以区分降香黄檀和海南黄檀的心材;DNA条形码分析结果表明,ITS2、trnV-trnM和psbA-trnH序列可以作为鉴定此二种的分子条形码序列。本研究可适应于鉴定降香黄檀和海南黄檀不同时期的植株及木材和药材,为保护野生植物资源和规范苗木、木材和药材交易市场提供数据支撑。
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荔枝GA信号途径基因LcPIF4的克隆及其功能分析
《果树学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：【目的】克隆荔枝GA信号途径的LcPIF4基因,并对其序列特征、表达特点、基因功能、亚细胞定位及互作蛋白进行研究。【方法】利用花穗RNA-seq数据对LcPIF4基因进行生物信息预测及分析,通过qRT-PCR对LcPIF4基因在不同组织的表达进行研究,并在表达水平上分析其对烯效唑的响应。通过拟南芥转基因株系的构建对其基因功能及亚细胞定位进行分析,同时利用酵母双杂分析其与Lc DELLA-1蛋白的互作。【结果】克隆的荔枝LcPIF4基因ORF长1 617 bp,编码539个氨基酸,且具有经典的APB结构域和HLH结构域。qRT-PCR结果表明,LcPIF4基因在花穗、叶片、果皮等器官表达水平较高,且烯效唑处理后其表达水平显著下降。转基因试验表明,在拟南芥中过表达LcPIF4基因可促进下胚轴生长,且过表达LcPIF4-YFP的转基因材料可在细胞核位置检测到荧光信号。酵母双杂交结果表明,LcPIF4与赤霉素途径阻遏蛋白LcDELLA-1存在直接的蛋白互作。【结论】荔枝LcPIF4蛋白具有拟南芥PIF4蛋白相同的结构域;LcPIF4在花穗中高表达,且其表达被烯效唑所抑制。LcPIF4可促进拟南芥下胚轴生长,其编码蛋白定位于细胞核。LcPIF4蛋白与Lc DELLA-1在酵母中存在互作。
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拮抗甜瓜枯萎病链霉菌D2菌株发酵条件的优化
《南方农业学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：【目的】优化甜瓜枯萎病拮抗链霉菌D2菌株的发酵条件,为该菌发酵方法的建立及工业化生产提供科学依据。【方法】以D2菌株有效活菌数为考察指标,玉米粉含量、豆饼粉含量、p H、摇床转速、接种量和温度为影响因素,利用响应面法对D2菌株的发酵条件进行优化。【结果】豆饼粉含量、玉米粉含量和温度对D2菌株有效活菌数有显著影响(P<0.05)。D2菌株有效活菌数回归模型为:Y=8.28757+0.12344X1+0.21477X2+0.06184X3-0.05929X12-0.09817X22-0.14942X32(式中,Y为有效活菌数对数,X1、X2和X3分别为玉米粉含量、豆饼粉含量和温度的编码值),理论有效活菌数为2.99×108CFU/m L。D2菌株最优发酵条件为:玉米粉含量39.08 g/L、豆饼粉含量39.19 g/L、培养温度37.4℃,在此条件下D2菌株有效活菌数为3.01×108CFU/m L,与理论值接近,但极显著高于未经优化采用培养基Ⅱ得到的有效活菌数(1.0×106CFU/m L)(P<0.01)。【结论】采用响应面法优化得到的D2菌株发酵条件可有效提高该菌株有效活菌数,且回归模型推算出的理论活菌数与优化条件发酵的有效活菌数接近,可用于指导D2菌株的实际规模化生产。
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香蕉枯萎病菌4号生理小种β2-微管蛋白基因敲除与表型分析
《果树学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：[目的]克隆并鉴定香蕉枯萎病菌(Foc4)β2-微管蛋白(β2-tub)基因,阐明β2-tub在多菌灵的抗药性及在病原菌致病过程中发挥的作用.[方法]采用PCR技术克隆了β2-tub的序列全长,并对其进行生物信息学分析.应用Splitmarker同源重组技术获得Foc4的β2-tub基因敲除突变体,并对其突变体的生物学表型、致病力及其对多菌灵的敏感性进行测定.[结果]生物信息学分析表明,Foc4 β 2-tub基因全长为1 694 bp,cDNA编码区全长1 347 bp,由4个内含子和5个外显子组成,编码蛋白含448个氨基酸.Foc4对多菌灵表现为敏感(EC50=0.51 μg·mL-1),与Foc4相比,β 2-tub基因敲除突变体对多菌灵的敏感性(EC50=0.36 μg·mL-1)表现显著增强,差异显著(p<0.05).与Foc4相比,β2-tub基因敲除突变体的生物学表型没有变化,对巴西蕉苗的致病力明显减弱.[结论]β2-tub基因具有高度保守性,β2-tub基因敲除突变体对细胞壁选择性压力、氧化压力和渗透压力均没有影响,但致病力下降,同时β2-tub基因的变化会引起Foc4对多菌灵抗性的改变.
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产酶芽胞杆菌的筛选及菌株HB13000的鉴定
《基因组学与应用生物学 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：芽胞杆菌产酶种类多、生长速度快、抗逆性强,在堆肥过程中发挥着重要作用。本研究采用水解圈法研究了348株芽胞杆菌产酶特性,获得产纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶芽胞杆菌34株。其中,菌株HB13000相对酶活力较高,酶活Hc(水解圈直径/菌落直径)分别为:纤维素酶Hc=4.30,蛋白酶Hc=1.47,淀粉酶Hc=3.25,对纤维素、淀粉和蛋白质均表现出较强的降解活性。依据菌体形态、生理生化特征和16S r DNA系统发育分析,鉴定HB13000为Bacillus methylotrophicus(甲基营养型芽胞杆菌)。本研究为有机物降解与农业废弃物堆肥提供了新的菌种资源。
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