科研产出
鲤鱼春季病毒出血症病毒G基因在昆虫细胞中的表达与鉴定
《中国兽医学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要:采用RT-PCR方法扩增鲤鱼春季病毒出血症病毒(SVCV)的糖蛋白(G)基因,将PCR产物插入到杆状病毒转移载体pFastBac 1中,获得重组转移载体pFastBac 1-G,将其转化入含有Bacmid的DH10Bac感受态细胞中,经3种抗性和蓝白斑筛选,获得含有G基因的重组穿梭质粒rBacmid-G。在脂质体转染试剂的介导下,将rBacmid-G转染sf9细胞,获得重组杆状病毒。提取重组杆状病毒基因组,用M13引物PCR鉴定。对重组杆状病毒感染的sf9细胞,通过电镜观察、SDS-PAGE、Western blotting进行检测,结果表明,重组蛋白在sf9细胞中获得正确表达,相对分子质量约58 000,与鼠抗SVCV阳性血清具有良好的反应原性。本试验为研究鲤鱼春季病毒出血症病毒G蛋白的生物学活性和亚单位疫苗的研制奠定了基础。
关键词: 鲤鱼春季病毒出血症病毒 G基因 杆状病毒表达
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骨桥蛋白(OPN)基因与动物繁殖性能的相关性
《饲料与畜牧(规模养猪) 》 2012
摘要:骨桥蛋白是一种重要的组织营养物质,在动物生殖过程中发挥着重要作用.文章就OPN的分子结构、OPN的生物学功能、OPN基因的表达调控以及OPN基因多态性与动物繁殖性能的关系作一综述.
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猪繁殖与呼吸综合征病毒核蛋白单克隆抗体的制备和初步鉴定
《吉林农业大学学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要:克隆了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CC-11株的N基因全序列,将其克隆至原核表达载体pET28a,转化E.coliRosetta株后经0.5 mmol/L IPTG诱导,获得了高水平表达。对表达的N蛋白进行纯化,以50μgN蛋白免疫BALB/c小鼠,3次免疫后,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,通过间接ELISA筛选,获得9B12、7C2、7C6共3株稳定分泌抗PRRSV-N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,亚型鉴定结果分别为IgG2b、IgG1、IgG1亚型。通过Western blot分析和间接免疫荧光测定表明,3株单抗对PRRSV CC-11株、CH-1R和JXA1-R细胞毒以及4份临床疑似病料均发生特异性反应。
关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 N蛋白 单克隆抗体
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链霉菌769接合转移体系的建立
《吉林农业科学 》 2012 CSCD
摘要:本研究确定了质粒pSET152从大肠杆菌(Escherichia coli)ET12567(pUZ8002)转移到链霉菌769中的接合转移的条件。在MS培养基上得到了最高的接合转移效率;孢子在50℃下热激10 min,供体菌和受体菌的比例为1:10,16~18 h后进行抗生素覆盖的情况下结合转移效率为1.03×10-6~1.23×10-5。经过连续5代的选择压力和PCR验证,表明质粒pSET152已经整合到受体菌株的染色体中。本研究首次建立了链霉菌769接合转移系统。
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