科研产出
玉米MAPK5基因片段的克隆及RNA干扰载体的构建
《吉林农业大学学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：采用RT-PCR方法从玉米品种B73幼苗中克隆出促分裂原活化蛋白激酶基因5(MAPK5)的cDNA部分片段(691 bp),与GenBank已发表的玉米MAPK5(AB016802)同源性达97%。重新设计带酶切位点的引物,克隆出长度为281 bp的正、反向片段。使用DNA重组技术,用pCAMBIA3300质粒构建了玉米MAPK5的RNAi载体。
关键词： 促分裂原活化蛋白激酶 基因克隆 干扰载体
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转Fat-1基因体细胞克隆草原红牛研究
《延边大学农学学报 》 2012
摘要：Fat-1基因的转基因动物克隆,为研究ω-3多不饱和脂肪酸的功能提供了高效、准确的医学、营养学动物模型。试验成功建立了草原红牛耳部成纤维细胞系,将Fat-1基因转染到草原红牛成纤维细胞,获得转基因阳性细胞克隆。以转基因细胞为核供体,体外成熟牛卵母细胞为核受体构建转基因克隆囊胚,比较未转基因与转基因克隆胚胎的体外发育情况。结果表明,体细胞重构胚体外囊胚率分别为26.04%和26.04%,两者之间无显差异著(P>0.05)。转Fat-1基因的草原红牛重构桑葚胚或早期胚胎移植到延边黄牛子宫内,有7头妊娠,但没能够获得妊娠足月个体。
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2010年我国核心期刊玉米研究相关文献计量分析
《玉米科学 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：通过利用《中国期刊全文数据库》和《维普中文科技期刊数据库》进行文献检索,采用文献计量学方法,对2010年在我国核心学术期刊上发表的玉米研究文献进行统计分析.结果表明,我国玉米研究文献集中发表在《玉米科学》期刊,占总发文量的19.06%,其次是《中国农学通报》、《安徽农业科学》和《种子》等期刊;文献下载频次总体随期刊影响因子的升高而增加,《玉米科学》下载频次最高;其次为《植物营养与肥料学报》和《中国农业科学》.我国玉米研究内容丰富,研究领域广泛,研究最多的是栽培,其次是遗传育种、综合利用、施肥和植物保护等.
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一种改良的快速高质大豆基因组DNA提取方法
《中国农学通报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：为了探索一种适用于大豆叶片基因组DNA的快速、高效的提取方法,在传统的SDS提取方法的基础上,通过将缓冲液成分和浓度进行改良并加入表面活性剂Tween-20,优化实验流程。用限制性内切酶对该方法提取的DNA进行酶切及电泳检测,可得均一弥散条带。以提取的DNA模版扩增大豆Actin基因,测序后证实片段正确。同样以其为模版以SSR引物Sctt011进行SSR-PCR反应,并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,也可观察到特异性明显且无杂质的目的条带。实验结果表明,该方法提取的DNA完全符合各种分子实验的要求。本研究方法可用于快速提取大豆叶片基因组DNA,同时提高了提取DNA的质量。
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狂犬病病毒糖蛋白单克隆抗体的制备
《中国畜牧兽医 》 2012 北大核心
摘要：用狂犬病病毒BD06株脑毒免疫BALB/c小鼠,制备G蛋白单克隆抗体。将灭活的BD06脑毒免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,通过间接ELISA法和荧光抗体病毒中和试验法进行4轮筛选,获得6F12、1B12共2株具有中和活性的糖蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。通过Western blotting分析和直接免疫荧光检测结果显示,获得一株针对狂犬病病毒糖蛋白构象表位的单抗6F12和一株针对糖蛋白线性表位的单抗1B12。小鼠中和试验结果显示,两株杂交瘤细胞分泌的抗体均具有狂犬病病毒中和活性。结果表明,获得了两株针对狂犬病病毒G蛋白不同抗原表位的中和活性单克隆抗体,为狂犬病病毒特性研究和检测奠定了基础。
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地方政府在农民专业合作社发展中的职能与推动对策——以山东省泰安市宁阳县为例
《青岛农业大学学报(社会科学版) 》 2012
摘要：地方政府在推动合作社发展中发挥着重要的作用,主要承担指导、扶持和服务等职能。山东省宁阳县在合作社创建上,推动依法办社、诚信办社、民主办社;在合作社发展上,扶持合作社、服务合作社、促进合作社;在合作社提高上,宣传合作社、培训合作社、推广合作社;在合作社促进上,充分发挥村干部的领导带头作用,为我国合作经济的发展提供了借鉴经验。当前,地方政府在推动合作社发展中,应充分认识政府部门的推动作用、重视合作社教育与培训、科学落实各项扶持政策、注重对法律法规的修订和完善。
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不同密度对大豆生理特性的影响
《黑龙江农业科学 》 2012
摘要：为确定大豆高产栽培合理密度,以长农18大豆为试验材料,研究了不同密度对大豆生理特性的影响。结果表明:叶绿素含量变化均呈现先升高后降低的趋势,光合速率呈现双峰曲线变化,出现了两次光合高峰值。蒸腾速率、气孔导度由V4期的最大值逐渐降低到R7期的最小值。单株干物质积累量呈"S"形曲线的变化,在R7期达到最大值。种植密度对叶绿素含量的影响是,从V4之后到R7期之前表现出明显差异,低密度的叶绿素含量高于高密度的叶绿素含量,在一定密度范围内,随着种植密度的增加光合速率降低,胞间CO2浓度升高,群体叶面积指数变大,单株干物质积累量逐渐减少。蒸腾速率和气孔导度变化趋势基本相同,随着种植密度的降低蒸腾速率升高、气孔导度变大。
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玉米淀粉分支酶SBEIIb基因片段酵母双杂交诱饵载体的构建及检测
《中国农学通报 》 2012 CSCD
摘要：为探寻玉米淀粉分支酶(starch branching enzyme,SBEIIb)与其互作蛋白的作用位点,构建了酵母双杂交诱饵栽体.根据CDD和NCBI对SBEIIb蛋白氨基酸序列的分析,确定玉米SBEIIb的功能域及非功能域,PCR扩增功能域及非功能域基因的目的片段,经回收纯化,用相同的限制性内切酶将其与载体 pGBKT7进行双酶切后,分别将目的基因片段与载体pGBKT7进行连接.构建了酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-SBEIIb-X (X=1,2,3,4,5,6),转化酵母菌AH109的菌液,OD600值在0.8以上,证明诱饵栽体 pGBKT7-SBEIIb-X对酵母菌AH109没有毒性作用;转化诱饵载体后的酵母菌AH109,在SD/-Trp/ X-α-Gal平板上长出白色菌落,在SD/-His/-Trp/X-α-Gal、SD/-Ade/-Trp/X-α-Gal平板上不能生长,排除了 pGBKT7-SBEIIb-X具有自激活宿主菌AH109的作用.构建的酵母双杂交诱饵栽体pGBKT7- SBEIIb-X (X=1,2,3,4,5,6),其表达对酵母细胞无毒性及对报告基因无自激活作用,可为下一步分析SBEIIb与其互作蛋白的作用位点奠定基础.
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