科研产出
环境中氯氟氰虫酰胺的残留检测方法
《农药 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：[目的]建立氯氟氰虫酰胺在水、土壤和沉积物中的高效液相色谱残留检测方法。[方法]样品经乙酸乙酯和乙腈萃取,弗罗里硅土和石墨化炭黑玻璃层析柱净化;Agilent-1260高效液相色谱检测。[结果]氯氟氰虫酰胺在各基质中的添加质量分数均为0.05、0.50、5.00 mg/kg,回收率为83.51%～100.62%,RSD为0.64%～7.63%;氯氟氰虫酰胺在水、土壤和沉积物中的最低检测质量分数为0.05 mg/kg。[结论]所建立方法的灵敏度、准确度和精密度均满足氯氟氰虫酰胺在水、土壤和沉积物中的残留分析要求。
大豆异黄酮含量相关SSR分子标记的研究
《分子植物育种 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：大豆异黄酮是大豆生长过程中形成的一类次级代谢产物,是一种重要的生物活性物质。本研究以异黄酮含量差异显著的‘中豆27’(4 447 ug/g)和‘台湾75’(2 062 ug/g)为亲本,构建了包括160个家系F2:6高代重组自交系群体。采用高效液相色谱方法测定双亲及群体各单株的不同异黄酮组分的含量。异黄酮不同组别中,大豆苷类含量最高,黄豆黄素苷类含量最低。异黄酮不同存在形式中,丙二酰基葡萄糖苷型含量最多,苷元型含量最少。使用197对在双亲间表现出多态性的SSR引物对RIL群体进行扩增。而后使用SAS程序的Proc GLM命令进行异黄酮含量和标记间的方差分析,在p<0.01显著水平上共检测到包括21个SSR标记的41个显著性互作。其中部分标记同时与多个不同的异黄酮成分相关;4个SSR标记与总异黄酮含量相关。本研究为高异黄酮含量育种的分子标记辅助选择奠定了基础。
关键词： 大豆 异黄酮 高效液相色谱 简单序列重复(SSR)
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金属络合剂酸性络蓝K在TNOS-LAMP可视化检测体系中的应用
《农业生物技术学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种快速、灵敏度高和特异性强的等温核酸扩增技术,已被广泛用于各领域。与此同时,高灵敏度也使得扩增时极易出现交叉污染,而利用闭管检测技术能有效降低其污染机率。本研究引入了一种新型的金属指示剂-酸性络蓝K(acid chrome blue K,ACBK),建立了闭管LAMP扩增和检测结果可视化检测技术。首先,本研究分别在LAMP扩增的起始体系中,先后分别测试ACBK与缓冲液、d NTPs、引物和Mg2+等组分反应,确定了含有ACBK的LAMP体系中的颜色变化由Mg2+决定,化学方法也进一步验证了这一结论。随后,对LAMP检测体系中的ACBK指示剂的浓度及Mg2+的浓度进行了选择和优化,最终选定25μL扩增体系中ACBK的检测浓度为:2μL 0.04%ACBK,Mg2+浓度为:6 mmol/L。以胭脂碱合成酶基因终止子(terminator of nopaline synthase gene,TNOS)为靶基因,建立了TNOS-ACBK-LAMP检测体系。建立的体系的检测灵敏度针对转基因水稻的检测限为100拷贝,在分别含有50 ng的水稻(Oryza sativa)、大豆(Glycine max)、油菜(Brassica napus)和玉米(Zea mays)基因组中能检测出0.1%的转基因含量。同时,利用不同转化事件及不同作物的转基因材料验证了其检测特异性,结果表明,构建的TNOS-ACBK-LAMP的检测系统具有很强的检测特异性。最终,将该检测体系成功用于对实际玉米样品转基因成分的检测,检测结果既可以裸眼直接判断也可以借助紫外可见光谱分析。该方法的建立为可以加快转基因成分检测的速度,同时也为等温扩增方法的判断提供了新的思路。
关键词： 环介导等温扩增(LAMP) 酸性络蓝K(ACBK) 金属指示剂 可视化 胭脂碱合成酶基因终止子(TNOS)
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生石花植株离体再生及组培快繁研究
《安徽农业科学 》 2016
摘要：[目的]建立生石花植株离体再生及组培快繁体系。[方法]以生石花成熟种子为外植体,研究生石花组培快繁技术。[结果]萌发后的幼苗在MS+0.50 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA培养基上被成功诱导出愈伤组织;不添加6-BA的MS培养基有利于愈伤组织的分化,不定芽诱导率为4.65;在MS+0.05 mg/L 6-BA+0.01 mg/L NAA培养基上不定芽增殖率较高,可达5.60。[结论]建立了生石花植株离体再生及快繁体系,有利于生石花种质资源保护和工厂化生产。
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农业科研事业单位后勤保障编外员工聘用管理探析
《浙江农业科学 》 2016
摘要：针对农业科研单位后勤保障服务人员队伍中的编外员工数迅速增加的现状,分析其必然趋势及其带来的身份归属与实际使用相分离、工资收入偏低等问题,进行了编外员工管理措施的探讨。提出以下对策:(1)完善编外职工身份管理制度,包括拓宽晋升渠道,创造良好的工作、活动与学习环境,逐步将编制管理推进到岗位管理;(2)改变思维定势,加强事业单位编外人员的组织支持感,如加强培训与培养,提高优秀编外人员的发展空间,鼓励编外人员参加院公开招聘,调动编外员工的工作积极性,提高编外人员对单位的信任感,并增强组织凝聚力;(3)给予合理的工资福利待遇,建立精细、量化的考核体系,根据专业技能、岗位责任、表现与贡献等因素给予合理的薪酬,并建议编外员工享有与编内职工同等的福利待遇,稳定编外人员队伍。通过编外员工管理体制机制的改革创新,保证农业科研事业单位后勤保障工作的可持续发展。
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生态工程技术控害稻田中两栖动物多样性调查
《中国植保导刊 》 2016 北大核心
摘要：通过样带法(50 m×3 m)对金华市汤溪镇寺平村生态工程技术控害稻田进行了两栖动物调查。结果表明,生态工程技术控害稻田中的两栖动物共有1目4科6种。动物区系为广布种3种,东洋界3种。广布种群体数量占总数的93.3%。生态类型中陆栖静水型4种,静水型2种。泽陆蛙(Fejervarya multistriata)是生态工程技术控害稻田环境中的优势种,种群密度与农户自防稻田中的泽陆蛙存在极显著差异(F=6.908;P≤0.001);黑斑侧褶蛙(Pelophylax nigromaculatus)为亚优势种,种群密度与农户自防稻田中的黑斑侧褶蛙差异不显著(F=1.375;P=0.266)。
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浙江省农业资源利用效率研究
《浙江农业科学 》 2016
摘要：采用气候资源利用效率、农业水资源利用效率、土地资源利用效率和社会经济资源利用效率4个指标组、8个具体指标,对2014年浙江省11个地市的农业资源利用效率进行综合评价。结果显示,区域内农业资源利用水平不一,杭嘉绍地区单位面积农产品产量处于省内最高水平,属于高投入、高产出和农业资源综合利用效率高水平区。省内部分地区由于土地、劳动力资源短缺,化肥利用率不高和农村废弃物资源浪费这些因素的制约,导致农业资源利用效率不高。
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不同材质砧板对卤猪舌中单增李斯特菌到黄瓜转移率的影响
《生物加工过程 》 2016
摘要：为探究不同材质砧板对卤猪舌中单增李斯特菌到黄瓜转移率的影响,选定木质、塑料和不锈钢为材质研究对象,根据消费者生活习惯设定砧板放置时间0、6和18 h,按照文献调研结果设定4种常见的场景,模拟家庭厨房食品制备过程,测定单增李斯特菌在卤猪舌、砧板和黄瓜之间的污染水平。同时,6和18 h后切黄瓜的试验中,通过结晶紫染色与显微镜观测,分析不同材质砧板上单增李斯特菌的生物菌膜形成情况。结果表明:4种场景下,砧板到黄瓜的转移率变化趋势相似,即同种材质砧板场景1、2、3和4呈现依次递减的趋势;不同材质砧板同种场景下,木质砧板到黄瓜的转移率较高,塑料和不锈钢砧板的转移率近似。此外,6和18 h单增李斯特菌膜并未形成,即短时间内散状的菌落个体无法繁殖成环状的菌膜结构。
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表达小鹅瘟病毒VP2蛋白重组鸭瘟病毒的构建及其生物学特性
《中国农业科学 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：【目的】鸭瘟和小鹅瘟是番鸭和鹅的两种重要传染病,鸭瘟最主要的防治措施是定期接种鸭瘟病毒减毒活疫苗。根据2012年国际病毒分类委员会(ICTV)的报告,DEV被归为疱疹病毒科的α疱疹病毒亚科马立克氏病毒属。疱疹病毒如伪狂犬病毒、马立克氏病毒、火鸡疱疹病毒等已广泛用于病毒活载体的研究,而近几年也有关于鸭瘟病毒(DEV)作为疫苗活载体的报道。为了为免疫防控鸭瘟和小鹅瘟提供新手段,本研究拟在鸭瘟病毒疫苗株感染性克隆的基础上,构建表达小鹅瘟病毒(GPV)主要免疫原蛋白VP2的重组病毒rDEV-VP2,并研究其生物学特性,进而探讨重组病毒rDEV-VP2作为防治DEV和GPV的二联重组活载体疫苗的可能性。【方法】将密码子优化的GPV VP2基因通过常规基因克隆的方法插入转移载体p EP-BGH-end,构建含有GPV VP2表达框p CMV-VP2-BGH-p A的重组表达质粒。在鸭瘟病毒(DEV)疫苗株细菌人工染色体克隆pDEV-EF1的基础上,通过"Red E/T"两步重组法将GPV VP2基因表达框插入到DEV US7和US8基因之间构建了突变体克隆pDEV-VP2。利用磷酸钙法转染鸡胚成纤维细胞(CEFs)拯救获得重组病毒rDEV-VP2和删除Bac质粒序列的rDEV-VP2-Cre,并对重组病毒细胞体外生长曲线、蚀斑大小和VP2蛋白表达情况进行测定。将rDEV-VP2接种番鸭,在不同时间采集血清,采用间接ELISA法检测血清中GPV VP2抗体产生情况。【结果】间接免疫荧光检测和Western blot分析表明,外源蛋白VP2在CEFs细胞成功表达。病毒生长曲线和蚀斑大小测定结果显示,rDEV-VP2在CEFs细胞上的增殖滴度与亲本株相比无显著差异,表明外源基因VP2的插入不影响rDEV重组病毒的增殖。动物试验结果表明,7日龄雏番鸭接种rDEV-VP2可以诱导产生针对GPV VP2的抗体,免疫后3周抗体阳性率为50%(4/8)。【结论】将小鹅瘟病毒的主要免疫原基因VP2插入到DEV疫苗株基因组的US7和US8基因间构建了表达该免疫原性基因的重组鸭瘟病毒细菌人工染色体,继而在鸡胚成纤维细胞(CEFs)上拯救获得了重组病毒rDEV-VP2,病毒细胞生长特性与亲本株基本一致,且能诱导鸭体产生GPV VP2特异性的抗体。该研究为研制DEV-GPV二联重组活载体疫苗奠定了基础。
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