科研产出
根癌农杆菌介导的灰葡萄孢菌遗传转化研究
《遗传 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：以pCAMBIA1300-N载体为骨架,成功构建了以绿色荧光蛋白(gfp)为报告基因,潮霉素(hph)为抗性筛选标记的载体pKPG,并利用根癌农杆菌介导转化系统,成功获得了能表达绿色荧光蛋白的重组灰葡萄孢菌。通过PCR检测转化子的绿色荧光蛋白基因和潮霉素抗性表达框,观察菌丝和分生孢子的荧光表型,以及gfp基因的Southern杂交验证,结果表明:被测转化子基因组中均成功整合了目的基因片段。
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山药PAL基因全长cDNA序列的克隆、表达与分析
《核农学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：为了阐明苯丙氨酸解氨酶(PAL,EC4.3.1.5)基因在山药地下块茎酚类物质积累过程中的分子机理,本研究运用普通PCR、RACE和TAIL-PCR技术从大薯(Dioscorea alataL.)’Zixiao’地下块茎中克隆到同一个PAL基因的3个片段,即长度分别为1 145bp、1 151bp和424bp的中间片段、3’端和5’端的cDNA序列;将3段cDNA序列拼接后获得大小为2 376bp的PAL基因全长cDNA序列,该序列含有一个1986bp的最大开放阅读框(ORF),一个28bp的5’端非翻译区,一个362bp含25 nt的Poly(A+)尾的3’端非翻译区,最大ORF可推测编码一个包括PAL酶活性中心的特征序列(GTITASGDLVPLSYIA)在内的661个氨基酸的多肽,分子量为71.974kDa,等电点6.310;大薯地下块茎的PAL基因分别在核苷酸与氨基酸水平上和GenBank中所选已知其他物种的同源性为73%~77%和76%~82%,说明PAL基因在系统进化上相对保守;RT-PCR分析表明该基因仅在地下块茎中表达,而且表达丰度在收获前逐渐降低。
关键词： 大薯 苯丙氨酸解氨酶 全长cDNA 基因克隆 序列分析 时空表达
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固定化木瓜蛋白酶水解制备乳酪蛋白肽工艺的研究
《浙江农业学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：以戊二醛为交联剂,制备壳聚糖微球固定木瓜蛋白酶,研究固定化木瓜蛋白酶水解制备乳酪蛋白肽的工艺。结果表明,壳聚糖固定化酶的制备条件,给酶量为0.4%,壳聚糖浓度为4%,加入的戊二醛(终浓度达到1.0%)交联,制备微球交联时间为3 h,制备得到的固定化酶活力最大,达167.1 U/mg。水解试验结果表明,pH 6.0,底物浓度4.0 mg/ml,流速0.6 ml/min,温度为55℃的工艺条件下,固定化木瓜蛋白酶水解乳酪蛋白的水解度达43.65%。
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填饲前后鹅PPARs基因组织表达特性的研究
《中国家禽 》 2008 北大核心
摘要：采用RT-PCR分析填饲前后朗德鹅11种组织PPAR基因的表达差异性,结果显示,除腹脂外,PPAR-α在其他10种组织中都有表达,其中较高表达于心脏、肝脏、肾脏、十二指肠和胸肌;中等程度表达于肌胃、全脑、腿肌;较低表达于脾脏和肺脏。填饲后发现该基因在肾脏中依然高表达,除肺脏中表达量升高外,在其他组织中表达量均下降。PPAR-γ较高表达于肝脏、脾脏、肾脏、十二指肠和腹脂,较低表达于其他组织。填饲后发现该基因在心脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌胃中表达量升高,在肝脏、十二指肠、全脑、胸肌、腿肌中表达量基本保持不变,在腹脂中表达量降低。结果表明PPARs的表达具有组织特异性,填饲前后的表达量变化反映PPARs基因影响鹅肥肝的形成。
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浙东白鹅催乳素基因表达特点
《遗传 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：克隆了浙东白鹅催乳素基因(Prolactin,PRL)的全序列,并应用荧光定量PCR技术研究了浙东白鹅在产蛋期、就巢期和恢复期时催乳素基因在下丘脑、垂体和卵巢中的表达特点。结果表明,浙东白鹅催乳素基因在就巢期、产蛋期和恢复期的表达量差异显著(P<0.05),在就巢期表达量最高,产蛋期次之,恢复期表达量最低。对不同组织PRL的表达量分析,发现在垂体与卵巢中的表达量、卵巢与下丘脑的表达量均有极显著的差异(P<0.01),但在垂体与下丘脑中的表达量差异不显著(P>0.05),在垂体表达量最多,其次是下丘脑,卵巢中的表达量最低。因此,浙东白鹅PRL基因在不同繁殖时期体内表达差异较大。
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