科研产出
硝酸银对根癌农杆菌介导的木薯遗传转化的影响
《生物技术通报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：旨在提高木薯遗传转化效率,以成熟培养10-15 d的华南木薯SC8品种的胚状体子叶为外植体,研究硝酸银在根癌农杆菌介导的木薯遗传转化中的影响。结果表明,硝酸银对木薯SC8胚状体子叶愈伤形成有明显的抑制作用,对不定芽的分化有显著的促进作用。硝酸银的浓度在2-8 mg/L,对未经农杆菌处理的SC8胚状体子叶不定芽的分化率从58.5%提高到87.5%;愈伤组织形成率从92%下降到15.3%。对经农杆菌处理的SC8胚状体子叶不定芽的分化率从55.3%提高到85.3%;愈伤组织形成率从87.5%下降到8.5%。同时发现,经农杆菌转化后不定芽诱导所需硝酸银的最适浓度高于未经农杆菌处理的不定芽诱导所需硝酸银最适浓度,前者为8 mg/L,后者为6 mg/L。硝酸银对木薯SC8的遗传转化有促进作用。
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水肥耦合对香蕉园土壤线虫群落结构及多样性的影响
《农业工程学报 》 2013 EI 北大核心 CSCD
摘要：以海南香蕉种植区为例,研究了水肥一体化条件下,不同水肥用量(低肥:每株香蕉施尿素400 g、磷酸二氢钾256 g、氯化钾1 024 g;高肥:每株香蕉施尿素500 g、磷酸二氢钾320 g、氯化钾1 280 g;低水:3 800 L/株,高水:4 750 L/株)对土壤线虫群落结构及多样性的影响。4个取样时期低肥低水(A)、低肥高水(B)、高肥低水(C)和高肥高水(D)4个处理的线虫总数、食细菌线虫数量、食真菌线虫数量、植物寄生线虫数量和捕食/杂食线虫数量均存在显著差异(P<0.01)。本试验田中共鉴定出土壤线虫22科34属,其中巴兹尔属(Basiria)和针属(Paratylenchus)为优势属。单增加施肥量显著增加了植物寄生线虫数量和捕食/杂食线虫数量,同时增加施肥量和灌水量显著增加了线虫总数、食细菌线虫数量和食真菌线虫数量。从整个生育期来看,线虫总数和4个线虫营养类群的数量在苗期均较低,抽蕾期和成熟期均较高。4个取样时期A、B、C和D4个处理的多样性指数(Shannon diversity,H)、自由生活线虫成熟度指数(Maturity index,MI)、通道指数(Channel ratio,NCR)、Wasilewska指数(Wasilewska index,WI)和富集指数(Enrichment index,EI)均存在显著差异(P<0.01)。单增加灌水量显著增加了结构指数(Structure index,SI)和EI指数,单增加施肥量显著增加了H和NCR指数,同时增加施肥量和灌水量显著增加了植物寄生线虫成熟度指数(plant parasite index,PPI)。从整个生育期来看,苗期的H、NCR、SI和EI指数较高,营养生长期的MI和WI指数较高,抽蕾期的优势度指数(dominance index,λ)较高,成熟期的PPI指数较高。该研究结果表明,土壤线虫群落结构的变化很好地反映土壤水肥的变化状况,土壤线虫可作为施肥和灌溉过程中土壤质量变化的生物学指标。
关键词： 土壤 肥料 灌水 香蕉 水肥一体化 土壤线虫 群落结构 生物多样性
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高粱花叶病毒外壳蛋白的原核表达及其抗血清制备
《生物技术通报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：高粱花叶病毒(Sorghum mosaic virus,SrMV)是世界上分布最广的侵染甘蔗的病毒之一,引起甘蔗花叶病,对甘蔗产业危害很大。根据SrMV外壳蛋白(coat protein,CP)基因序列合成一对引物,以海南(SrMV-HN)染病植株总RNA为材料,采用RT-PCR方法克隆了长约987 bp的目的片段。将CP基因与质粒pET32a(+)连接,构建了含SrMV CP基因的融合蛋白原核表达载体pET32a-SrMVCP。然后用正确的重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导后,SDS-PAGE检测出一条约36kD的特异融合蛋白表达谱带。融合蛋白主要以可溶性蛋白形式稳定表达。通过优化诱导条件,确立了CP基因表达的最佳条件:IPTG终浓度为0.1 mmol/L,诱导时间为4 h,诱导温度为30℃。用Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析纯化融合蛋白,免疫家兔制备出抗血清。通过酶联法(ID-ELISA)测定本试验制备的SrMV CP抗血清工作浓度为1∶1 000,Western blotting检测结果表明,抗血清与SrMV-HN诱导表达的CP蛋白发生特异性反应。对田间25个甘蔗样品进行检测,结果表明该抗血清的效价高、灵敏度高、特异性强,可以应用于田间样品的检测。
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巴西橡胶树HbSIP1基因启动子的克隆和序列分析
《中国农学通报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：为研究橡胶焦磷酸酶基因的表达特征及其在天然橡胶生物合成中调控机理,根据巴西橡胶树焦磷酸酶基因HbSIP1序列,利用GenomeWalker方法对HbSIP1基因启动子序列进行了分离,对其序列进行了生物信息学分析,并构建了含有该序列的植物表达载体pSIP1-1381Z。结果表明:分离获得了1198bp的HbSIP1基因启动子序列,该序列具有真核生物典型启动子结构特征,并含有众多应答激素和胁迫信号的调控元件。对HbSIP1的启动子区的克隆和分析,为进一步研究HbSIP1的功能和表达调控机制奠定基础。
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巴西橡胶HbERF3启动子的克隆与分析
《广东农业科学 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：根据巴西橡胶HbERF3基因序列,利用GenomeWalking技术对其启动子进行克隆和分析,得到了长度为1 572 bp的HbERF3基因的5’端上游启动子区,且分析结果表明,该序列具有典型的真核生物核心启动子区和转录起始位点,除了含有多个TATA-box、CAAT-box等基本顺式元件外,该序列还包含多种与激素应答、逆境胁迫相关的元件。对HbERF3启动子区的克隆和序列分析,为进一步研究HbERF3的表达调控和功能奠定了基础。
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工程菌P.pastoris GS115(pPIC9K-lac2)的构建及诱导表达漆酶的研究
《工业微生物 》 2013 CSCD
摘要：用PCR法扩增枯草芽孢杆菌的漆酶基因lac2。构建表达质粒pPIC9K-lac2。通过电转法将lac2基因重组于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性和高表达漆酶的转化子作为工程菌GS115(pPIC9K-lac2)。在发酵罐中发酵GS115(pPIC9K-lac2)表达重组蛋白。在50 L发酵罐中加入20 L无机盐发酵培养基。在发酵的第一阶段连续24 h补加50%甘油-0.8%PTM4增殖P.pastoris,然后用甲醇-0.8%PTM4诱导49 h。在发酵过程中,通过调节搅拌的频率和通气量,将溶氧维持于20%～30%,用氨水维持pH 5.0.放罐时生物量为A_(600)=266.5,表达漆酶1097.5U/L发酵液。
关键词： 漆酶 枯草芽孢杆菌 基因表达 P.pastoris 发酵 高密度发酵
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细菌介导RNAi研究甘蔗二点螟蜕皮调节转录因子CiHR3基因功能
《应用昆虫学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：甘蔗Saccharum officinarum L.是热带和亚热带地区种植的主要作物之一,也是许多国家和地区重要的糖料来源。为了解决甘蔗在农业生产中常常被甘蔗螟虫为害,重点控制甘蔗二点螟Chilo infuscatellus Snellen是一条显著提高甘蔗产量和品质的有效途径。近年来,RNA干扰技术已发展成为控制虫害、提高作物品质的新方法,通过dsRNA诱导的RNA干扰可以用来研究昆虫功能基因。本文以甘蔗二点螟蜕皮调节转录因子CiHR3基因为靶标,建立细菌介导的RNAi方法表达CiHR3基因dsRNA,通过提取靶标基因dsRNA,喂饲甘蔗二点螟3龄和5龄幼虫,结果显示:3龄甘蔗二点螟幼虫在一周内发生形态显著变化、体重明显下降;5龄甘蔗二点螟幼虫在一周内形态也出现显著变化,更明显的是出现畸形蛹,非正常化蛹。本研究结果验证了昆虫蜕皮调节转录因子CiHR3可作为甘蔗二点螟生物防治的靶标基因,为后续植物介导的RNAi表达dsRNA防治甘蔗螟虫打下很好的基础。
关键词： 细菌介导RNAi 甘蔗二点螟 CiHR3 生物活性测定
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辛硫磷与阿维菌素对桉树枝瘿姬小蜂的混配增效作用
《农药 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：[目的]研究不同作用机制的杀虫剂混配对桉树枝瘿姬小蜂增效作用。[方法]采用玻管药膜法测定辛硫磷与阿维菌素混用对桉树枝瘿姬小蜂成虫的生物活性,研究2种药剂的联合增效作用。[结果]辛硫磷与阿维菌素对桉树枝瘿姬小蜂具有一定的生物活性,并以有效成分7∶1混配,表现增效作用,共毒系数为220.38,对幼虫、蛹和成虫的校正死亡率分别为76.47%、66.67%和64.00%,优于单剂单独使用。[结论]辛硫磷与阿维菌素混用对桉树枝瘿姬小蜂有增效作用,其中以有效成分7∶1混配增效作用最好。
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巴西橡胶树蔗糖磷酸合成酶基因的克隆和表达分析
《热带作物学报 》 2013 CSCD
摘要：分析橡胶树EST数据库,得到一个注释为SPS(蔗糖磷酸合成酶)的EST序列重叠群(contig)。通过PCR扩增和测序技术获得该基因的全长cDNA和基因组序列,命名为HbSPS1。序列分析显示,HbSPS1基因长度为5 298 bp,包含13个外显子和12个内含子。对应的cDNA编码序列(CDS)为3 156 bp,推测编码1 050个氨基酸,分子量大小为118.1 ku,等电点为6.05。采用荧光定量PCR技术分析该基因的表达模式,结果表明,HbSPS1基因主要在胶乳中表达,在乙烯利和机械伤害处理的胶乳中呈下调表达,在割胶影响下略有上调表达趋势,同时该基因在叶片发育过程中呈上调表达。说明HbSPS1基因可能参与胶乳蔗糖代谢和叶片发育调控。
关键词： 巴西橡胶树 蔗糖磷酸合成酶 表达分析 乙烯利 机械伤害
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PRSV-NIb基因同源dsRNA的原核表达及其在番木瓜叶片原生质体瞬时表达体系中诱导RNA沉默的研究
《热带作物学报 》 2013 CSCD
摘要：为探索利用PRSV-NIb基因同源dsRNA的原核表达产物在体外防治番木瓜环斑病毒的可行性,利用较保守的PRSV-NIb基因3′端的312、501和809 bp区段分别构建了含有PDK内含子的3个发夹RNA编码结构,并选用pSP73和M-Jm109LacY分别作为宿主载体和宿主菌构建了高效的dsRNA原核表达工程菌M-Jm109LacY/pSP73-RNAi-N312、M-Jm109LacY/pSP73-RNAi-N501、M-Jm109LacY/pSP73-RNAi-N809,经IPTG诱导成功表达了dsRNA,并证明dsRNA不被DNase I和RNase A降解,稳定性较好。还利用PRSV-NIb基因构建了GFP瞬时植物融合表达载体pNIb-GFP,对经3种dsRNA和GFP瞬时融合表达载体共转化的番木瓜叶片原生质体的共聚焦显微镜观察及通过半定量RT-PCR对其中mRNA表达量的分析,结果表明融合基因NIb-GFP的表达均发生了不同程度的下调,说明dsRNA在原生质体中引发了针对同源基因的沉默。
关键词： 番木瓜环斑病毒 核内含体蛋白b dsRNA 原核表达 RNA沉默
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