文献类型： 中文期刊

作者： 沈锦城 ¹ ; 张泽华 ¹ ; 杨穗珊 ² ; 张添元 ³ ; 罗进贤 ³ ; 张爱联 ² ;

作者机构： 1.海南大学农学院

2.中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物技术重点开放实验室

3.中山大学基因工程教育部重点实验室生物化学系

关键词： 漆酶;枯草芽孢杆菌;基因表达;P.pastoris;发酵;高密度发酵

期刊名称： 工业微生物

ISSN： 1001-6678

年卷期： 2013 年 43 卷 01 期

页码： 36-40

收录情况： CSCD

摘要： 用PCR法扩增枯草芽孢杆菌的漆酶基因lac2。构建表达质粒pPIC9K-lac2。通过电转法将lac2基因重组于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性和高表达漆酶的转化子作为工程菌GS115(pPIC9K-lac2)。在发酵罐中发酵GS115(pPIC9K-lac2)表达重组蛋白。在50 L发酵罐中加入20 L无机盐发酵培养基。在发酵的第一阶段连续24 h补加50%甘油-0.8%PTM4增殖P.pastoris,然后用甲醇-0.8%PTM4诱导49 h。在发酵过程中,通过调节搅拌的频率和通气量,将溶氧维持于20%～30%,用氨水维持pH 5.0.放罐时生物量为A_(600)=266.5,表达漆酶1097.5U/L发酵液。