科研产出
牛干扰素-tau基因的原核表达及生物功能鉴定
《农业生物技术学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：采用PCR方法直接从牛早期胚胎细胞中扩增牛干扰素-tau(bovine interferon-tau,bIFN-τ)基因,并克隆到pGEM-T载体中。然后将含信号肽和不含信号肽的bIFN-τ片段分别与原核表达载体pET-30a(+)连接,并用IPTG诱导表达。重组蛋白经Ni2+亲合层析纯化后,通过抗病毒检测和对靶细胞形态变化的影响检验其生物学功能。实验结果显示,以胚胎裂解液为模板、不提取胚胎基因组DNA,可以从少量(5枚)的牛囊胚中直接扩增出bIFN-!基因,与GenBank(XM-593584)序列相比,核苷酸和氨基酸的同源性分别为99%和97%;不含信号肽序列的重组质粒诱导表达后,经SDS-PAGE电泳检测发现约在20kD处出现特异性蛋白条带,与目标蛋白分子量一致;纯化后重组蛋白的抗病毒活性单位为1×104IU/mg;在牛子宫内膜上皮细胞培养液中添加2.9μg/mL纯化的rbIFN-!蛋白后24h,细胞体积明显增大,细胞内出现囊泡状结构。表明实验获得了具有一定生物活性的rbIFN-!蛋白。
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产芽孢细菌T99生防作用评价及其活性产物分析
《中国生物防治 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：从京郊菜田土壤中分离获得一株具显著抗菌活性的产芽孢细菌T99。室内离体测定表明其对多种植物病原真菌及细菌均具很好的抑制作用,对峙培养法测定对苹果轮纹病菌的抑菌带宽达15mm;牛津杯法测定对蜡状芽孢杆菌抑菌圈直径达24mm。温室和田间小区防治试验其对甘蓝枯萎病的防治效果分别达89.9%和81.5%,优于对照药剂多菌灵。其发酵液中的抗菌物质耐酸碱、抗热性和抗紫外照射能力强,且可用硫酸铵沉淀法和正丁醇单一溶剂提取。粗提物对蜡状芽孢杆菌的最小抑制浓度为350μg/ml。
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中国化肥资源供需矛盾及调控策略
《自然资源学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：鉴于中国化肥供需形势不清给产业调控带来不确定性影响,论文分析了化肥资源供需矛盾,并提出了相关调控策略。结果表明,中国化肥供需总量已经接近平衡,氮磷钾化肥的自给率分别达到100%、95%和29%。少部分产品存在缺口,其中氯化钾的自给率为23%,是当前我国惟一紧缺的化肥产品。随着化肥生产向资源产地集中,中国化肥供需时空不平衡有扩大的趋势。部分时间段的供需不平衡异常尖锐,其中10月份至来年3月份全国化肥供应过剩超过900×104t,而部分月份却极端不足,例如7月份两广、东北等地的尿素缺口达200×104t左右,10月份华北地区的磷酸二铵缺口达到100×104t左右,而5、7、8三个月中两广地区的钾肥缺口也超过100×104t。建议国家加强储备工作,储备化肥消费量的15%,其中10%储备在淡季,以减少过剩的压力,而5%储备在旺季,以应对市场供不应求。
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采用RNA干扰技术分析拟南芥Ca~(2+)泵基因ECAJ的功能
《植物生理学通讯 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：构建了含拟南芥Ca~(2+)泵基因ECA1特异片段反向重复结构的RNA干扰(RNAi)载体,以根癌农杆菌介导转化拟南芥,用卡那霉素筛选和PCR检测,获得了11个T_3代纯合体转基因株系;半定量RT-PCR方法检测ECA1在转基因株系中转录的结果表明,其转录产物比野生型(WT)明显低,且转基因株系之间差异明显,表达水平有一个梯度关系;在1/2MS培养基上转基因株系与野生型的差异不明显,相对于野生型而言,在相对低Ca~(2+)(0.2mmol·L~(-1))或相对高Mn~(2+)(0.5 mmol·L~(-1))的培养基上的转基因株系生长受到不同程度的抑制,ECA1转录量越低,生长受到的抑制越大。据此认为:ECA1对植物的生长发育和抵御逆境胁迫有作用。
关键词： Ca~(2+)泵 RNA干扰(RNAi) 转录后基因沉默
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利用RNAi技术提高玉米直链淀粉含量
《农业生物技术学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：为了提高玉米直链淀粉含量,用基因枪将前期工作中构建的sbeⅡb RNAi表达载体pBAC413导入玉米(Zea mays)自交系幼胚愈伤组织,经过筛选获得了12株转化再生植株,其中6株获得了结实种子。DNA点杂交、PCR扩增和PCR-Southern均证明目的基因已整合到T_0代再生植株玉米基因组中。对T_1代转基因玉米籽粒淀粉含量进行测定,结果表明总淀粉含量比对照没有显著变化,其中1个转基因玉米株系的直链淀粉含量比对照提高了15.6%。
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缺铁和过量重碳酸盐胁迫下丛枝菌根真菌对枳生长的影响
《园艺学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：采用盆栽沙培试验,研究了缺铁及重碳酸盐胁迫下丛枝菌根(arbuscular mycorrhiza,AM)真菌地表球囊霉(Glomus versiforme)对枳[Poncirus trifoliata(L.)Raf.]实生苗生长及植株铁营养状况的影响。结果表明,在pH7.0和pH8.0的重碳酸盐胁迫下,与未接种处理相比,接种AM真菌显著增加了枳实生苗的株高、茎粗、地上部和地下部干样质量,并且明显促进了叶片叶绿素和活性铁的积累,显著提高了叶片Fe/P的比值,减轻了枳因缺铁引起的黄化现象。
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ZmPti1基因正义和RNAi表达载体的构建及其转化玉米的研究
《华北农学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：构建了ZmPti1基因的正义表达载体和RNAi载体,以bar基因为抗性筛选标记,通过花粉管通道法将构建的两个表达载体分别转化到玉米自交系178。收获的种子播种于营养钵中,出苗后,经0.1%的草丁膦筛选得到40株草丁膦抗性植株,进一步用PCR鉴定与PCR-Southern检测得到33株转基因植株,其中15株是转化正义表达载体的转基因植株,18株是转化RNAi表达载体的转基因植株。并对转化方法和ZmPti1基因的功能进行了讨论。
关键词： ZmPti1基因 正义表达载体 RNAi载体 花粉管通道法 转基因植株
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大白菜和黑芥种间杂种的获得及鉴定
《华北农学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：为丰富大白菜的抗病基因类型,特别是培育根肿病抗性种质,以品质优良的大白菜(Brassica campestrisL.pekinensis)自交系为母本,具有黑腐、根肿病抗性的野生黑芥(B.nigra)为父本,通过种间杂交,获得了13株杂种植株。利用形态学、细胞学和分子标记3种方法对杂种进行了鉴定,并分析了杂种的花粉活力及其育性。结果表明:杂种表型介于白菜和黑芥双亲之间,SRAP分子标记结果的聚类分析表明杂种在DNA水平上更趋向于白菜母本。F1雄蕊发育不好,花粉育性低,13株杂种中,仅获得杂种H4的回交后代。杂种H4的部分细胞染色体数目超过18条,约48%的细胞染色体数目为26条,超过了预期杂种染色体的数目。不育F1植株染色体数目等于和少于18条,结果提示杂种育性和细胞染色体数目有一定关系,染色体数目的增加提高了杂种的育性。
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水氮交互作用对甘蓝产量和硝酸盐吸收累积的影响
《华北农学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：了解不同灌水量和氮肥用量条件下甘蓝生物量变化和不同生育期硝酸盐累积规律,为甘蓝生产中氮素的高效利用和提供硝酸盐安全蔬菜产品生产中合理灌水和施肥提供依据。以北京市种植的甘蓝品种为对象,采用田间裂区试验方法,设置1800,3000,4800 m3/hm23个水平灌水量主处理和0,150,300,450 kg/hm24个水平氮素用量副处理,测定收获期产量,分析甘蓝莲座期、结球期、收获期硝酸盐含量。结果表明,1800,4800 m3/hm2灌水量在不同氮肥用量交互作用下甘蓝产量都显著低于3 000 m3/hm2灌水量处理;产量随施氮量的增加而增加,450 kg/hm2较高施氮量处理下,产量下降,甚至低于150 kg/hm2较低施氮量处理。生长前半期是甘蓝吸收氮素较多的时期,不同灌水量和氮肥用量处理下莲座期植株硝酸盐含量都远高于蔬菜硝酸盐限量国家标准,较低、较高灌水量在不同氮肥用量交互作用下含量相对较低,3000 m3/hm2灌水量和300,450 kg/hm2氮肥用量下有较高的硝酸盐含量。随甘蓝生育时期的延长,硝酸盐含量呈显著性下降,到60 d收获时都降到蔬菜硝酸盐限量标准以下;3000,4800 m3/hm2灌水量在不同氮肥用量交互作用下含量显著高于1800 m3/hm2处理;氮肥施用条件下含量都高于不施氮处理,施氮处理之间没有显著差异。较低、较高灌水和较高氮肥用量条件不利于甘蓝的生长和对氮素的吸收利用,增加了氮素环境流失污染风险;3000 m3/hm2灌水和300 kg/hm2氮肥用量条件有利于甘蓝生长、氮素的吸收利用,降低菜田地下水硝酸盐污染风险;增加产量,适当时期收获并能提供符合硝酸盐含量标准的蔬菜产品,具有较好经济收益。
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甜玉米氮素吸收利用的基因型差异
《植物营养与肥料学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：以近年来育成的22个甜玉米品种为材料,在同一供氮水平下对其氮素吸收利用的基因型差异进行了研究。结果表明,不同品种产量、氮素积累量和氮素利用效率都存在着显著差异。氮素积累量变幅为126.6~243.8kg/hm2,鲜果穗和鲜子粒氮素利用效率的变幅分别为43.56~2.0 kg/kg和28.44~6.0 kg/kg。聚类分析结果看出,鲜果穗、鲜子粒均表现为高产、氮素积累量大、氮素利用效率高的品种是金凤5号、穗美9701和金师王,其氮素积累量均值为214.4 kg/hm2,鲜果穗和鲜子粒的氮素利用效率分别为50.8 kg/kg和38.2 kg/kg。通径分析表明,氮素积累量对不同品种产量的作用大于氮素利用效率对产量的作用,说明鲜食甜玉米品种的高产关键在于改良品种的氮素积累量,并在此基础上提高氮素的利用效率。
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