科研产出
碱蓬PEAMT基因的克隆及表达分析
《中国农学通报 》 2015 CSCD
摘要：研究旨在克隆碱蓬的耐逆相关基因——磷酸乙醇胺甲基转移酶(phosphoethanolamine N-methyltransferase,PEAMT)的编码基因,分析PEAMT基因调控机制,为进一步研究PEAMT基因的功能和碱蓬的耐盐机制奠定分子基础。依据Gen Bank数据库发表的其他物种的PEAMT序列设计简并引物,通过降落PCR法获得碱蓬PEAMT基因全长c DNA,命名为Sg PEAMT,生物信息学软件分析其序列特点,荧光定量PCR检测其表达特性。序列分析表明Sg PEAMT基因开放阅读框为1485 bp,编码494个氨基酸,推测其为亲水性蛋白。保守结构域分析表明,Sg PEAMT含有2个独立的S-腺苷甲硫氨酸依赖性甲基转移酶的保守结构域,每个结构域含有4个基序。系统进化树分析确认Sg PEAMT与同属的碱蓬属植物亲缘关系最近。实时荧光定量PCR分析显示,盐胁迫或ABA胁迫下碱蓬根、茎、叶中Sg PEAMT基因的表达上调,特别是叶中表达量最高。研究结果表明,Sg PEAMT基因受Na Cl和ABA诱导表达,预示Sg PEAMT基因可能在碱蓬对盐胁迫的反应中起重要作用,是一种参与碱蓬耐盐反应的有效耐逆基因,为植物基因工程提供有效的耐逆基因。
关键词： 碱蓬 Sg PEAMT基因 荧光定量PCR 生物信息学
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浙江省规模化畜禽养殖固体废弃物资源化利用途径的探讨
《浙江农业科学 》 2015
摘要：总结浙江省规模化畜禽养殖中废弃物的污染及治理状况,阐述畜禽养殖固体废弃物处置存在的主要问题,并提出相应的畜禽养殖固体废弃物资源化利用新技术。
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重组猪干扰素-α单克隆抗体的制备和鉴定
《浙江农业学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：利用自动发酵罐培养毕赤酵母,甲醇诱导其分泌表达重组猪IFN-α(r Po IFN-α);经硫酸铵沉淀、G-25琼脂糖柱脱盐处理及阴离子交换柱和分子筛层析纯化。以纯化r Po IFN-α蛋白作为抗原免疫6周龄BALB/c鼠3次后,取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA筛选和3~5次亚克隆,共获得5株均能稳定分泌抗r Po IFN-α单克隆抗体的杂交瘤细胞株。抗体亚类鉴定、特异性和叠加试验结果表明,这5株抗体均属于Ig G1亚类,能与r Po IFN-α产生特异性反应,其抗原结合位点相同或相近。该研究有助于进一步推动r Po IFN-α单克隆抗体在猪免疫学以及猪疫病诊断中的应用。
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猪源结肠小袋纤毛虫培养、分子鉴定和显微观察
《浙江农业学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：小袋纤毛虫病是一种人畜共患寄生虫病。本研究从浙江地区病猪盲肠内分离到了一株结肠小袋纤毛虫,通过RPMI1640培养基对其进行了体外培养,结肠小袋纤毛虫在28℃和37℃均能良好生长,在培养后第5天和第4天分别达到高峰值,虫体密度分别为1.60×104和2.31×104个·m L-1。显微镜下滋养体胞口、胞肛和食物泡结构明显,DAPI染色后大核明显呈哑铃型,且滋养体有大小差别明显的2种类型。18S r RNA基因PCR扩增、测序和聚类分析结果显示,猪源结肠小袋纤毛虫分离株存在2条明显不同的18S r RNA基因序列,序列间趋异性为0.6%,且该分离株序列与国外分离株间存在显著差异,在进化树上形成一独立的亚枝。在高倍显微镜下,滋养体内常见有许多生物活动,种类不明,16S r RNA基因PCR扩增到3条未知细菌序列,未知细菌16S r RNA基因序列与结肠小袋纤毛虫内微生物间的确切关系有待研究。
关键词： 结肠小袋纤毛虫 体外培养 18S r RNA基因
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有机肥对大白菜叶柄黑点症及叶缘黑点症的影响
《浙江农业科学 》 2015
摘要：通过田间试验研究了不同施肥方法对大白菜叶柄黑点症及叶缘黑点症的影响,同时也对大白菜叶柄黑点症及叶缘黑点症的关系进行了初步研究。结果表明,在34个品种(系)中,施有机肥与施尿素处理下,大白菜叶柄黑点症发生程度无差异的有12个,施尿素比施有机肥症状发生加重的有16个,施有机肥比施尿素症状发生加重的有6个;在33个品种(系)中,施有机肥与施尿素处理下,大白菜叶缘黑点症发生程度无差异的有10个,施尿素比施有机肥症状发生加重的有12个,施有机肥比施尿素症状发生加重的有11个;基因型对大白菜叶柄黑点症及叶缘黑点症都有显著的影响;不同采收期对大白菜叶柄黑点症及叶缘黑点症的发生程度都有影响;大白菜叶柄黑点症及叶缘黑点症是2种不同的生理性病害。
关键词： 大白菜 叶柄黑点症 叶缘黑点症 有机肥 尿素 抗性
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基于超高效液相色谱-串联质谱快速测定草莓中典型杀菌剂
《浙江农业科学 》 2015
摘要：本研究基于超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱仪建立草莓中典型杀菌剂的快速检测方法。样品经快速,简便,经济,高效,可靠和安全(Qu ECh ERS)的快速前处理方法处理后,经Waters BEH C18色谱柱分析,流动相为甲醇和水(含5 mmol·L-1甲酸铵溶液)(9∶1,V∶V),以0.25 m L·min-1的流速洗脱。采用电喷雾正离子源,多反应监测模式进行化合物的调谐和分析。对建立的方法进行方法验证和实际样品分析,各杀菌剂在不同添加浓度下的样品回收率为80.9%~113.7%,在1~200 ng·m L-1进行线性拟合,R2均>0.991 4,检出限为0.2~0.9 ng·m L-1。实际样品分析发现,草莓样品仍有杀菌剂检出。
关键词： 杀菌剂 超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱 草莓
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IL8基因3'UTR SNPs与中国荷斯坦牛泌乳性状的关联分析
《浙江农业学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：为明确白细胞介素8基因(IL8)在浙江省内不同牛种群体间的遗传变异情况,应用PCR-SSCP技术检测了中国荷斯坦牛、温岭高峰牛和温州水牛IL8基因3'UTR的多态性。PCR-SSCP和测序结果表明,中国荷斯坦牛和温岭高峰牛在IL8基因3'非翻译区存在3个完全连锁的SNP(g.2831A/G,g.2904 T/C,g.3030 G/A)构成的单倍域,温州水牛在这些位点均表现为突变纯合型。利用一般线性模型分析IL8基因3'UTR的3个SNPs对中国荷斯坦牛305 d校正产奶量、乳脂量、乳蛋白率及体细胞评分的影响,发现这些SNPs可显著影响中国荷斯坦牛305 d校正产奶量(P<0.01)和乳脂率(P<0.05)。
关键词： IL8 3'UTR SNPs 中国荷斯坦牛 温岭高峰牛 温州水牛
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一株乳酸杆菌ZL43的分离鉴定及抑菌机制初探
《食品科技 》 2015 北大核心
摘要：目的:对从泡菜中分离到有较强抑菌活性的乳酸菌ZL43进行鉴定,并对其抗菌谱和抑菌机制进行研究。方法:采用形态学、生理生化特征结合16S r DNA序列分析,对菌株ZL43进行鉴定;采用杯碟法测定ZL43的抗菌谱;通过ZL43对大肠杆菌细胞超微结构、细胞蛋白的合成等方面的研究,探讨ZL43的抑菌机制。结果:菌种鉴定结果表明,ZL43为短乳杆菌(Lactobacillus brevis);ZL43对革兰阳性细菌和革兰阴性细菌均具有较好的抑制作用。扫描电镜结果表明ZL43可以导致大肠杆菌细胞壁破裂或形成孔洞;SDS-PAGE分析表明ZL43能影响大肠杆菌蛋白质的表达与合成。结论:短乳杆菌ZL43具有广谱抑菌活性,可以使细菌的细胞壁破裂或形成孔洞,导致胞内一些物质泄漏,并影响细菌蛋白的合成,使细胞生长受到抑制,进而导致其死亡。
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草莓主要污染微生物类群抑菌清洗方法研究
《浙江农业学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：为寻找新型安全的草莓抑菌清洗剂及其清洗方法,选用自来水、0.02%次氯酸钠、2.0%乳酸、2.0%苹果酸、2.0%柠檬酸、0.1%亚氯酸钠和0.1%酸化亚氯酸钠(p H 2.3)分别浸泡清洗草莓2和10 min,检测其对草莓表面菌落总数、大肠杆菌、酵母、霉菌和鼠伤寒沙门氏菌的去除效果。然后根据各抑菌清洗剂对草莓表面微生物的去除效果,获得最佳的草莓抑菌清洗方法。研究结果表明,0.1%酸化亚氯酸钠清洗2 min抑菌效果最佳,其次为2.0%乳酸、2.0%苹果酸和2.0%柠檬酸清洗10 min,柠檬酸酸化亚氯酸钠为草莓及其同类果蔬抑菌清洗的最佳候选方法之一。
关键词： 草莓 菌落总数 霉菌 酵母 大肠杆菌 鼠伤寒沙门氏菌
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