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小麦种子高分子量谷蛋白亚基的高通量检测方法

分子植物育种 2015 北大核心 CSCD

摘要:为建立小麦种子高分子量麦谷蛋白亚基(HMW-GS)高通量检测方法,本研究改进了传统聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)中的样品制备和电泳分析方法,提高了检测效率。具体方法为:在小麦种子无胚端切取其体积的1/4~1/5,置于单孔容积为200μL的96孔PCR扩增板中,并在每个微孔中放入1粒直径2 mm的钢珠,并加入浸泡缓冲液静置1~2 h,再加入提取缓冲液,经高通量研磨器(Retsch Tissue Lyser)研磨后,在60℃的烘箱静置30 min。对微孔板离心和上清液预处理后在DYCZ-30C高通量垂直版电泳槽进行电泳分离,获得清晰的HMW-GS分离图谱。该方法简易、快速、成本低,适用于小麦标记辅助选择和资源评价中的大规模HMW-GS组成的检测。

关键词: 小麦 高分子量谷蛋白亚基 高通量检测

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不同日龄猪伪狂犬抗体的检测与分析

江苏农业科学 2015 北大核心

摘要:应用猪伪狂犬病毒gp I抗体检测试剂盒和猪伪狂犬病毒g B抗体检测试剂盒对某规模猪场的2~22周龄11个阶段的110份血清同时进行上述2种抗体检测,以掌握不同日龄猪伪狂犬野毒的感染情况并制定适合本场的猪伪狂犬的免疫程序。结果显示:该场不同日龄猪伪狂犬gp I抗体全部为阴性,仔猪伪狂犬的母源抗体可以维持到10周以上,说明目前场内采用10周龄进行猪伪狂犬疫苗的免疫接种方法是科学的。

关键词: 伪狂犬 gpI抗体 gB抗体 免疫接种

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潍坊某猪场一起伪狂犬病的诊治

畜牧与兽医 2015 北大核心

摘要:2014年9月山东潍坊某猪场发生疑似猪伪狂犬病疫情,采集病死仔猪的脑组织等,利用Vero细胞做病毒分离,并设计一对伪狂犬病病毒(PRV)g E基因片段的特异性引物对分离病毒进行PCR鉴定及家兔接种试验。结果表明:脑组织上清液接种Vero细胞后有典型的细胞病变;PCR扩增产物电泳后显示出990bp长的目的片段,目的片段基因序列与6株PRV毒株的g E基因序列核苷酸同源性在97.7%~100%之间,证实该病毒为PRV;分离病毒接种家兔出现典型的伪狂犬病症状。临床诊断结合实验室鉴定以及动物接种试验,确诊该病例为猪伪狂犬病。

关键词: 伪狂犬病病毒 分离 鉴定 诊治

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传染性法氏囊病病毒感染对鸡细胞模式识别受体及抗病毒基因转录的影响

中国预防兽医学报 2015 北大核心 CSCD

摘要:为研究传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染对鸡细胞模式识别受体(PRRs)及天然免疫抗病毒基因转录的影响,本实验分别采用IBDV弱毒感染DT40细胞和强毒感染SPF鸡,以荧光定量RT-PCR(q RT-PCR)检测感染细胞和法氏囊组织中PRRs(TLR2、TLR3、TLR4、TLR7、MDA5和LGP2)及天然免疫抗病毒基因(IPS-1、IRF3、PKR、OAS、Mx)的m RNA转录变化。在IBDV感染DT40细胞的2 h到24 h内,ch MDA5、ch TLR3、ch LGP2、IRF3、PKR、OAS、Mx的转录水平显著上升,分别为324、22、61、29、16、225 000和18 700倍。当采用si RNA分别敲除DT40细胞中ch MDA5、ch TLR3和ch LGP2时,IPS-1、IRF3、PKR、OAS和Mx在IBDV感染后的2 h到24 h差异变化不显著。在IBDV感染SPF鸡法氏囊组织细胞中,ch MDA5和ch TLR3的表达显著降低,而ch LGP2表达无显著差异,IRF3、PKR、OAS和Mx的转录水平显著上升。TLR4和TLR7在IBDV的体外和体内感染试验中均未检测到,而IPS-1在IBDV的体外和体内感染试验中均变化不显著。本实验结果表明,ch MDA5、ch TLR3和ch LGP2在识别IBDV的感染中起着关键作用,IBDV感染严重抑制了PRRS ch MDA5和ch TLR3的转录,并且提示其抑制作用在体内与体外可能存在不同的分子机制。

关键词: 传染性法氏囊病病毒 模式识别受体 天然免疫

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大豆GmNAC011基因的分离及对异黄酮合酶基因GmIFS2的调控分析

华北农学报 2015 北大核心 CSCD

摘要:通过对不同异黄酮含量品种大豆的转录组测序分析,发现GmNAC011基因在不同品种间的表达量存在显著差异。为了研究该基因的功能,根据大豆基因组序列设计引物,从大豆根系中克隆到GmNAC011基因完整的开放性阅读框(ORF)(Opening reading frame)序列,通过生物信息学对该序列进行分析,结果显示:该基因编码268个氨基酸,蛋白质分子量为31 k Da,理论等电点为8.3。进化树分析发现该蛋白与GmNAC2亲缘关系较近,属于NAC转录因子ATAF1亚家族。通过RT-PCR的方法分析了GmNAC011基因与异黄酮合酶基因GmIFS2在不同组织中的表达模式,结果显示GmNAC011与GmIFS2呈现相似的表达趋势,均为在花中表达量相对较低,而在根、茎、叶和荚中的表达量较高;通过酵母单杂交实验发现GmNAC011可以与GmIFS2基因启动子中的"CGTG"基序结合,这些结果说明了GmNAC011基因参与调控GmIFS2基因的表达,进而可以调控异黄酮的合成。

关键词: 大豆 转录因子 GmNAC011 异黄酮合酶基因

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生物炭对菜地土壤氮平衡及酸碱缓冲能力的影响

环境科学研究 2015 北大核心 CSCD

摘要:针对太湖地区菜地化肥氮投入量较大导致氮淋失严重及土壤酸化的现状,选取太湖地区的菜地土壤,利用盆栽试验连续种植三季小白菜,结合生物炭埋袋回收技术,研究不同化肥氮施用量(以N计,0和110 mg/kg)及生物炭添加量(w为0%、1%、2%和5%)对土壤氮淋失及酸碱缓冲能力的影响.结果表明:在化肥氮施用量为110 mg/kg条件下,与无生物炭添加相比,生物炭添加量为2%时可使作物对土壤矿质态氮的利用效率提高约1倍(由41%增至81%),因化肥氮施用引起的土壤氮素残留量降低83%;生物炭添加可有效减少48% ~ 65%的土壤氮淋失量,当添加量为1%、2%时,生物炭主要通过削减淋失液中ρ(TN)来降低土壤氮淋失量;添加量为5%时,则主要通过削减淋失液体积来实现.无论是否添加化肥氮,生物炭均能有效维持土壤原有的pH、w(有机质)及w(盐基离子);促使土壤酸碱缓冲能容量增加22% ~37%,致酸速率降低17%~ 80%,显著提升了土壤的酸碱缓冲能力.研究显示,在化肥氮施用量为110 mg/kg条件下,生物炭添加量为2%时能对土壤酸化产生较好的缓冲效果.

关键词: 生物炭 氮利用率 氮淋失量 土壤酸碱缓冲能力 菜地土壤

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秸秆批式和半连续式发酵物料浓度对沼气产率的影响

农业工程学报 2015 EI 北大核心 CSCD

摘要:为比较秸秆批式发酵和半连续发酵工艺的产沼气效果,以水稻秸秆为单一发酵底物,开展了室内中温批式发酵和半连续发酵对比试验,以容积产气率和原料产气率为特征指标,研究不同料液浓度对秸秆批式和半连续发酵产沼气的影响,以期获得秸秆沼气工程适宜的运行参数。结果表明,批式发酵容积产气率随着TS浓度的增加而增加,但增幅逐渐减少;与静态批式发酵相比,间歇搅拌有助于提高批式发酵容积产气率,特别对高TS浓度处理容积产气率的提升效果更加明显;而半连续进料条件下更有利于高TS浓度处理容积产气率的提高,但各处理原料产气率均随着固物滞留时间(solid retention time,SRT)缩短而逐渐降低。综合考虑产气情况及工程应用实际,建议秸秆批式发酵底物质量分数不超过8%,而半连续发酵TS质量分数8%时SRT设计为20 d(容积产气率1.00 m3/(m3·d)),若发酵TS质量分数6%时,SRT设计为15 d,容积产气率0.75 m3/(m3·d),该运行参数为秸秆沼气工程发展提供了理论依据。

关键词: 秸秆 沼气 发酵 发酵物料浓度 批式 半连续

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菊芋菊糖的提取、聚合度分布及抗氧化活性的研究

食品与生物技术学报 2015 北大核心 CSCD

摘要:以新鲜菊芋为原料,比较热水浸提、酶法、超声和微波辅助热水浸提4种提取方法对菊芋菊糖的提取率、聚合度、抗氧化能力的影响。采用不同截留相对分子质量的超滤管对提取液中菊糖聚合度分布进行分析,通过清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、羟基自由基(·OH)和超氧阴离子自由基(O2-·)试验来研究菊糖体外抗氧化活性。结果表明,菊芋菊糖最佳提取工艺为:料液质量体积比1 g∶20 m L,微波功率800 W,间歇式辅助处理6 min,提取温度80℃,提取时间120 min,菊糖得率为15.35%。酶法辅助提取对菊糖聚合度基本没有影响,超声和微波辅助造成菊糖平均聚合度下降,其中聚合度3060的菊糖比例由13.6%下降到6.8%和3.6%。不同体外抗氧化体系中,4种方法提取所得菊糖均表现出一定的抗氧化能力,且与其质量浓度呈明显量效关系。其中,微波辅助提取法所得菊糖对活性氧自由基的清除作用最强,显示出较强的抗氧化活性。

关键词: 菊芋 菊糖 提取 聚合度 抗氧化

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不同成熟期黄肉桃糖酸组分的测定

江苏农业科学 2015 北大核心

摘要:以23份早熟、26份中熟、11份晚熟黄肉桃品种为材料,使用高效液相色谱(HPLC)测定果肉中糖酸含量,并进行分析比较。结果表明,不同成熟期黄肉桃各糖、酸组分的含量及其所占总量的比例均有差异,并有明显的规律。蔗糖含量及其所占总糖的比例表现为早熟>中熟>晚熟;山梨醇则正好相反,为早熟<中熟<晚熟;葡萄糖和果糖表现为晚熟高于早熟和中熟,早熟与中熟间差异不显著;苹果酸含量及其所占总酸的比例表现为早熟<中熟<晚熟;奎尼酸与苹果酸相反,表现为早熟>中熟>晚熟;不同熟期间柠檬酸差异不显著。不同成熟期的黄肉桃总糖含量、总酸含量差异不显著,但糖酸比和甜酸比则表现为早熟>中熟>晚熟,早熟品种显著高于中熟和晚熟品种。

关键词: 黄肉桃 成熟期 积累特点 组分

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保护性耕作对南方稻麦两熟高产农田土壤碳库特性的影响

西南农业学报 2015 北大核心 CSCD

摘要:在江苏省苏州市稻麦两熟高产农田进行了5年的田间定位试验,分析了保护性耕作对土壤不同层次总有机碳、活性有机碳含量的短期影响,计算了各处理的土壤碳库管理指数。结果表明:与常规耕作相比,少免耕、常规耕作+秸秆还田、少免耕+秸秆还田处理显著提高0~5、5~10 cm土层土壤总有机碳、活性有机碳含量及土壤碳库管理指数,常规耕作+秸秆还田处理还有利于提高10~20 cm土层土壤总有机碳、活性有机碳含量及土壤碳库管理指数,但保护性耕作对20~30 cm土层土壤碳库特性无显著影响。相关分析显示,短期内少免耕主要是通过增加土壤总有机碳含量提高土壤碳库管理指数,而常规耕作+秸秆还田、少免耕+秸秆还田主要是通过增加土壤总有机碳含量以及改善土壤有机碳活度来增加土壤碳库管理指数。

关键词: 保护性耕作 土壤总有机碳 活性有机碳 碳库管理指数 稻麦两熟

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