科研产出
短短芽胞杆菌FJAT-0809-GLX几丁质酶基因(chiD)的克隆与原核表达
《热带作物学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：以短短芽胞杆菌FJAT-0809-GLX基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到几丁质酶基因chiD序列,再将chiD序列连接到pMD18-T克隆载体上,形成重组载体pMD18-T-chiD,转化大肠杆菌DH5ɑ并测序,经过核苷酸和氨基酸序列分析获得几丁质酶基因chiD的序列片段为1 524 bp,编码507个氨基酸,理论蛋白质分子量约54.55 ku,其等电点约为5.77,表明该几丁质酶为酸性几丁质酶。将重组质粒pMD18-T-chiD双酶切后与表达载体pET-28a连接,构建重组表达载体pET28a-chiD,并转入大肠杆菌BL21中进行IPTG诱导表达,结果表明:重组蛋白质的分子量约55 ku,与预测的蛋白分子量结果一致。为了提高重组蛋白的表达量,对培养时间、IPTG浓度和温度3个参数进行优化,并将表达产物进行SDS-PAGE分析,最后得出重组载体pET28a-chiD的最佳诱导表达参数分别为8 h、0.5 mmol/L和28℃。这为短短芽胞杆菌来源的几丁质酶的进一步研究奠定了良好基础。
关键词： 短短芽胞杆菌 几丁质酶基因 克隆 表达 IPTG诱导
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叶片乙醇酸氧化酶基因全长cDNA的分离与表达研究
《江西农业大学学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：乙醇酸氧化酶(glycolate oxidase,GLO)是植物光呼吸途径中的一种限速酶,催化羟乙酸盐氧化成乙醛酸盐和H2O2,与植物的诱导抗病性密切相关。试验从已构建好的(Prunus salicina Lindl.var.cordata J.Y.Zhang et al.)5个不同生长发育时期叶片的均一化全长cDNA文库中分离得到了一个乙醇酸氧化酶(GLO)基因,命名为PsGLO。序列分析表明,PsGLO基因cDNA全长为1 531 bp,开放阅读框为1 122 bp,编码374个氨基酸。氨基酸多重序列比对表明,该基因与陆地棉乙醇酸氧化酶基因相似性最高,为90%。荧光定量PCR分析表明,PsGLO基因在叶中木奈叶芽、展开叶、幼叶、成熟叶、老叶5个不同生长发育时期中都有表达,其中,老叶中表达量最高,叶芽最低。
关键词： (Prunus salicina Lindl.var.cordata J.Y.Zhang et al.) 乙醇酸氧化酶 全长cDNA 表达分析
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蚕豆花左旋多巴提取工艺优化
《中国农学通报 》 2014 CSCD
摘要：为了提高蚕豆花左旋多巴的提取得率,采用加热回流提取法优化蚕豆花左旋多巴提取工艺。通过单因素和正交试验设计,考察液料比、溶剂p H、提取时间对蚕豆花左旋多巴提取得率的影响,确定最佳提取工艺条件为:液料比20:1,溶剂p H 4.5,提取时间2 h,在此条件下左旋多巴提取得率为3.67%,相比冷浸法提高了3.67%。本工艺中使用乙醇来调节溶剂的p H值,可以抑制水溶性杂质的析出,经HPLC谱图分析,提取物中杂质组分较少,且左旋多巴与杂质组分分离较好,这有利于左旋多巴进一步的纯化。本研究可为从蚕豆花中工业化提取左旋多巴提供技术依据。
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刺葡萄幼胚愈伤组织诱导及其高产原花青素细胞系筛选
《植物生理学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：以刺葡萄幼胚为材料,研究不同培养方式、培养基配方和培养条件对其愈伤组织诱导的影响,采用正交试验设计法筛选刺葡萄愈伤组织继代增殖的培养基配方,并对继代保持的培养条件和方式进行优化,同时进行了高产原花青素刺葡萄愈伤组织细胞系的筛选研究。结果表明,刺葡萄幼胚以平放的方式接种到MS+1.0 mg·L-1 2,4-D或MS+1.0 mg·L-1 2,4-D+0.5mg·L-1 KT的固体培养基上,在黑暗的条件下,能有效的诱导出愈伤组织,诱导效率为80%;刺葡萄愈伤组织继代增殖以MS+1.5 mg·L-1 2,4-D或MS+1.5 mg·L-1 2,4-D+0.5 mg·L-1 KT的固体培养基为佳,并且采用此两种培养基交替继代培养,在光照条件下能长期保持旺盛且生长一致的刺葡萄愈伤组织;筛选出了紫红色松脆状的高产原花青素的刺葡萄愈伤组织细胞系,培养35 d后每克鲜样的原花青素含量可达1 671.16μg。
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圆果种黄麻新品种‘闽黄1号’的选育
《福建农业学报 》 2014
摘要：优质高产抗病圆果黄麻新品种‘闽黄1号’是以圆果种黄麻‘孟引1号’为材料,采用Co60 2.5万伦琴γ射线辐射诱变,以选择高产、稳产、优质、抗病为目标,经7年9代系谱选择育成。2011-2012年参加全国黄麻新品种区域试验,平均纤维产量3 131.25kg·hm-2,比对照‘黄麻179’(CK1)增产7.45%,比对照‘宽叶长果’(CK2)增产8.08%,均达极显著水平;2012年参加全国黄麻新品种生产试验,平均纤维产量2 964.75kg·hm-2,比对照‘宽叶长果’(CK2)增产7.36%,且纤维品质优良,是一个优质高产抗病的黄麻新品种。
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不同供氮水平多花黑麦草化感抑草作用与资源竞争分析
《安徽农业科学 》 2014 北大核心
摘要：[目的]为了判断黑麦草与猪殃殃的化感作用与资源竞争关系。[方法]运用化感-竞争分离法,通过盆栽混播不同比例的供、受体植株,测定受体植株干重的变化规律,以探讨黑麦草对猪殃殃杂草的化感作用或资源竞争的关系。[结果]当黑麦草和猪殃殃混播比例较大时(供受体混播比例为12∶10),会由竞争作用转为化感作用;而在氮素胁迫条件下,两者的关系均会加强,在氮水平为10kg/667m2时,化感作用最强,随着氮水平的加大,抑制作用减弱,竞争作用逐渐加强。[结论]明确黑麦草与猪殃殃的资源竞争与化感作用的关系,为黑麦草化感抑草作用研究提供理论依据。
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检测鸭坦布苏病毒乳胶凝集试验的建立及初步应用
《福建农业学报 》 2014
摘要：以制备的鸭坦布苏病毒单克隆抗体致敏乳胶,建立检测鸭坦布苏病毒抗原的乳胶凝集方法。经优化后确定其最佳致敏抗体量为300μg、最佳致敏时间为3h、致敏温度为37℃。以乳胶凝集试验和RT-PCR对73份自然感染病例进行检测,分别检出阳性27、31份,两者检出的阳性符合率为87.1%。本方法快速、简便,适用于基层应用。
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