科研产出
小西葫芦黄花叶病毒外壳蛋白基因植物表达载体的构建
《果树学报 》 2004 北大核心 CSCD
摘要:小西葫芦黄花叶病毒(Zucchiniyellowmosaicvirus,ZYMV)是危害中国葫芦科作物主要病毒之一。试验以该病毒中国分离物外壳蛋白基因的克隆载体pZCP-87(含ZYMV的CP基因)为材料,经SalⅠ和BamHⅠ双酶切,从胶上回收目的基因,与经过同两种酶酶切的植物表达载体pBIN438连接,转化感受态的大肠杆菌细胞,提取质粒,经PCR和SalⅠ/BamHⅠ双酶切验证,已将该病毒外壳蛋白基因克隆到植物表达载体上(重组质粒命名为pBZCP5),采用冻融法完成了对pBZCP5质粒的农杆菌转化。该工作是通过转基因获得抗ZYMV病毒研究的基础。
利用RNAi抑制口蹄疫病毒的复制(英文)
《中国兽医学报 》 2004 北大核心 CSCD
摘要:根据口蹄疫病毒 IRES和 L 串联序列两侧的保守区域设计了 2个引物 ,利用 RT- PCR和 PCR方法扩增出该串联序列 ,并进行了测序。测序结果表明 ,扩增产物与 Gen Bank上相应的序列具有很高的序列同源性 (大于 99% )。在测序的基础上 ,选择了 L 基因上的 1个靶位点 (位于启始密码子下游第 2 2 9nt后 2 1 nt长的序列 ) ,合成了 si RNA表达盒SEC- L2 2 9。细胞单层长成 5 0 %~ 70 %时 ,将纯化的 SEC- L2 2 9转染到 BHK细胞中 ,转染 4 h后用高感染复数 FMDV接种 ,2 4 h后用间接免疫荧光方法对口蹄疫病毒在 BHK细胞中的复制进行检测。研究结果表明 ,SEC- L 2 2 9极大地抑制了口蹄疫病毒在 BHK细胞中的复制 ,且该抑制作用具有序列特异性 ,并降低了 BHK细胞的死亡率。另外 ,2 5 ng和5 0 ng SEC- L2 2 9处理组间对病毒复制的抑制作用差异不明显 ,可能是病毒基因组发生了突变。本试验表明 ,利用 PCR方法合成的 SEC在 BHK细胞中能特异性地抑制 FMDV的复制 ,RNAi技术可能为防治口蹄疫提供一个新的途径


上海奉贤南十家村土壤养分空间变异分析初探
《上海农业学报 》 2004 CSCD
摘要:采用传统统计方法和地质统计学方法相结合 ,对面积约 80hm2 的奉贤区南十家村农田耕层土壤养分进行了空间变异特征分析。结果表明 ,土壤N、K、Zn普遍缺乏 ,土壤养分变异系数的大小次序为 :P >Zn >Mn >B >S >Fe >N >Cu >Mg >K >Ca ;许多土壤养分含量的空间变异结构明显 ,土壤Fe、P、K、B、Mn具有中等强度的空间相关特征 ,土壤OM、N、Ca、Mg、S、Cu、Zn具有较强的空间相关特征。


青贮玉米的饲用价值和生产利用
《上海农业科技 》 2004
摘要:玉米乳熟期果穗、茎、叶经加工贮藏后用作饲料,适口性好,具有较高的能量和良好的饲料转化效率,是家畜特别是奶牛理想的优质青贮饲料。近年来随人民生活水平提高,畜牧业迅速发展,人们逐渐开始重视青贮玉米的研究与利用。


苹果多酚氧化酶双链RNA干扰(RNAi)研究
《实验生物学报 》 2004 北大核心 CSCD
摘要:以成熟苹果果实的RNA为模板,经RT-PCR扩增并克隆苹果多酚氧化酶(APPO)长度为710bp的反义、正义基因片段。以副球菌中类胡罗卜素合成有关的(crtW+crtY)融合基因片段YYT为间隔区,将APPO反义基因片段、YYT和APPO正义基因片段串联,构成全长为2446bp的DNA并插入到植物双元载体pYPX145中,构成可表达苹果多酚氧化酶双链RNA的植物双元载体pYF7704。以根癌农杆菌介导的叶盘转化法转化苹果栽培品种红富士,通过50mg/L卡那霉素筛选和CUS检测,获得了转基因苹果抗性芽。荧光定量RT-PCR检测结果显示,转基因苹果抗性芽内多酚氧化酶基因的干扰效果达91.69%以上,研究结果证实多酚氧化酶双链RNA干扰在转基因苹果上是可行的。
关键词: 双链RNAi APPO基因 载体构建 遗传转化 苹果 荧光定量 RT-PCR

