选择性多聚腺苷酸化及microRNAs对绵羊ACSL1基因表达的影响

曹阳; 张立春; 于永生; 马惠海; 刘宇; 曹阳; 《中国农业大学学报 》 2022 北大核心 CSCD

摘要：为探究长链脂酰辅酶A合成酶(Long-chain acyl-CoA synthetases,ACSLs)在绵羊脂肪组织的表达规律,利用cDNA末端快速扩增技术(RACE)和双荧光素酶活性检测系统等方法进行研究.结果表明:1)绵羊ACSL1基因因选择性多聚腺苷酸化(Alternative polyadenylation,APA)存在2个不同长度的3'UTR;2)较短的3'UTR在绵羊前体脂肪细胞诱导分化前期更活跃,并且短3'UTR更有助于ACSL1蛋白表达;3)miR-202、miR-449a、miR-124a、miR-218均可与ACSL1 3'UTR结合,降低荧光素酶活性,其中miR-218通过与ACSL1 3'UTR的1 264~1 271 bp处结合可显著降低ACSL1表达.综上,ACSL1基因因选择性多聚腺苷酸化存在不同长度的3'UTR,且短3'UTR有助于基因表达;miR-218可显著下调ACSL1基因表达.本研究为绵羊ACSL1基因的进一步研究提供理论依据.

关键词： 选择性多聚腺苷酸化;ACSL1;microRNA;基因表达

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Plackett-Burman试验联用响应面法优化枯草芽孢杆菌产α-淀粉酶培养基营养成分

李达; 孙慕白; 苗欣宇; 牛红红; 孙瑞悦; 王景会; 《中国调味品 》 2022 北大核心

摘要：以枯草芽孢杆菌发酵液产α-淀粉酶为对象,考察发酵液营养组成成分条件.在发酵培养基组成单因素试验的基础上,结合Plackett-Burman筛选试验、营养组分最低添加量、最陡爬坡试验和响应面Box-Benhnken试验方法,选择出对试验结果具有显著影响的因素,建立各显著性因素的二次回归方程模型,根据试验实际情况,得到最佳发酵营养成分配方:糖蜜25.0 g/L、酵母粉7.6 g/L、硫酸锰6.0 g/L、磷酸二氢钾7.0 g/L、胰蛋白胨8.0 g/L、氯化钠3 g/L、磷酸二氢钠5 g/L、磷酸氢二钾1 g/L,平均发酵液淀粉酶酶活为(2084±21)U/g.调整后实测值与二次回归方程预测值吻合良好.

关键词： 枯草芽孢杆菌;响应面;α-淀粉酶;培养基

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肉羊维持净能需要量的不同测定方法研究

李柏浩; 梁浩; 冯彩蕊; 杨华明; 班志彬; 李立佳; 徐莹; 闫晓刚; 《中国畜牧杂志 》 2022 北大核心

摘要：研究旨在通过回归法和绝食法测定小尾寒羊×杜泊羊杂交肉用羊(杜×寒肉羊)在生长期(20 kg)和育肥期(40 kg)时的维持净能需要量,比较测定方法间的异同.第1阶段选取24只体重(20±3)kg的杜×寒肉羊,第2阶段选取24只体重(40±5)kg杜×寒肉羊,公母各半,2个阶段分别分为4组,每组6个重复.前3组为回归法测定维持能量需要量,分别按照自由采食量的100%、80%、60%进行限饲,第4组为维持需要组.试验羊限饲7 d后各组随机选取2只羊,称重后转入特制代谢笼中适应1 d后进行4 d消化代谢试验后转入呼吸代谢舱进行4 d的呼吸测热试验,每次试验期为16 d,每阶段重复3次试验.结果表明:生长期杜×寒羔羊维持净能需要量为224.08 kJ/kg BW0.75(回归法)、232.84 kJ/kg BW0.75(绝食法);育肥期杜×寒肉羊维持净能需要量为271.33 kJ/kg BW0.75(回归法)、279.20 kJ/kg BW0.75(绝食法).绝食法测定维持净能需要量略高于回归法,2种方法无显著差异,可根据试验条件选取适宜的测定方法.

关键词： 杜×寒肉羊;生长期;育肥期;维持净能需要量

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‘吉胜’李生产中存在的问题及解决对策

王雪松; 李锋; 陈蕾; 崔龙; 张艳波; 隋松兵; 马巍; 《北方果树 》 2022

摘要：李在中国栽培历史悠久且分布广泛。作为我国原产树种,栽培面积和产量均列世界第一位(198.7万hm~2,680.4万t)。垂直分布最高海拔4 000 m,水平分布由黑龙江至台湾[1]。果实色泽鲜艳,营养丰富,兼具药用和保健作用,深受人们喜爱[2,3]。李作为吉林省主要果树栽培树种,栽培面积排名第二,仅次于苹果。

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非洲猪瘟病毒MGF505-3R蛋白的原核表达研究

王凤杰; 魏天; 张芳毓; 王成宇; 张守峰; 扈荣良; 吕礼良; 王永志; 《吉林畜牧兽医 》 2022

摘要：为获得非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)体外诱导表达的MGF505-3R蛋白.实验依据GenBank中报道的MGF505-3R基因序列设计引物,引入His标签,以ASFV基因全序列为模板扩增目的基因.将目的基因克隆至原核表达载体pGEX-6p-1,并转入大肠杆菌Transetta(DE3)中.用1 mmol/L异丙基 β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达菌体,分别取上清液和沉淀进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝胶电泳分析.将表达的蛋白经过Ni-NTA琼脂糖亲和层析纯化.免疫印迹实验(Western-blot)分析蛋白的活性.克隆得到的MGF505-3R基因片段长度为843 bp,与原序列一致.蛋白在沉淀中以包涵体的形式表达,相对分子质量约为53 ku.纯化后可得到纯度较高的MGF505-3R重组蛋白.免疫印迹实验结果呈阳性.MGF505-3R蛋白可以在大肠杆菌Transetta(DE3)中表达并纯化,蛋白具有良好的表达活性.近几年,多基因家族(Multigene Families,MGFs)基因缺失疫苗被认为是目前ASF疫苗研制的主要方向,本研究获得的MGF505-3R重组蛋白将为ASFV MGF505-3R蛋白的研究提供基础,也为基因缺失疫苗相关免疫学方面的检测提供前期技术储备.

关键词： 非洲猪瘟病毒;MGF505-3R蛋白;原核表达;蛋白纯化;免疫印迹实验

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RNAi转基因大豆品系'B5C9123-5'的RPA可视化检测技术

张晨; 雷展; 李凯; 李飞武; 商颖; 许文涛; 《中国农业大学学报 》 2022 北大核心 CSCD

摘要：为开发RNAi转基因作物的田间可视化鉴定方法,以DNA嵌合染料SYBR Green Ⅰ为材料,采用设置重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA)特异性引物的手段,建立了 一种快速、低成本、可视化的RPA用于转基因大豆'B5C9123-5'的检测.结果表明,在靶标不存在时,RPA体系中游离的SYBR Green I染料使溶液呈现较弱的黄色荧光.在靶标存在的情况下,RPA扩增产生的双链DNA与SYBR Green I结合导致溶液从黄色转变为绿色并使荧光迅速增强.通过对RPA扩增时间和温度进行优化,阳性结果可在20 min内用肉眼鉴别,检测限为1.00 ng/μL.通过设置不同RPA引物,该方法可用于现场快速检测多种RNAi转基因作物.

关键词： RNAi转基因作物;重组酶聚合酶扩增;可视化检测;SYBRGreenI

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PGPR对莠去津污染土壤中结缕草生长及生理的影响

郑培峰; 姜小蕾; 翟彦霖; 郭绍霞; 李伟; 《中国农学通报 》 2022

摘要：探究接种植物根际促生菌(PGPR)对结缕草幼苗生长与生理代谢的影响,为莠去津污染土壤中种植草坪草提供理论依据。采用双因素试验设计,以结缕草幼苗为材料,将幼苗分为PGPR(荧光假单胞杆菌,Pseudomonas fluorescens)接种和未接种两组,进行莠去津处理(浓度梯度为0、3、15、75 mg/kg),并测定不同莠去津浓度下接种PGPR对结缕草的生长指标、防御性酶活性、光合参数和叶绿素荧光参数的影响。结果表明,接种荧光假单胞杆菌促进了结缕草生长,对不同浓度的莠去津胁迫均具有一定的缓解作用,其中3 mg/kg莠去津浓度下接种菌剂的促进作用最为明显,与对照相比,接菌后结缕草叶片叶绿素a、b分别提高45.8%和39.5%;净光合速率(Pn)增加184.83%;最大光化学效率(Fv/Fm)和PSII潜在活性(Fv/Fo)分别提高9.9%和41.04%;过氧化物酶(POD)活性、可溶性蛋白和脯氨酸含量分别是对照的2.96倍、1.94倍和2.37倍;结缕草株高、地上部鲜重及地上部干重分别比对照增加71.43%、47.69%和78.13%。综上,接种PGPR可促进结缕草的生长,增加叶绿素含量,提高光合作用能力,对缓解低浓度莠去津毒害效果显著。

关键词： 荧光假单胞杆菌 莠去津 结缕草 光合 生理

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RNAi转基因大豆品系‘B5C9123-5’的RPA可视化检测技术

张晨; 雷展; 李凯; 李飞武; 商颖; 许文涛; 《中国农业大学学报 》 2022 北大核心 CSCD

摘要：为开发RNAi转基因作物的田间可视化鉴定方法,以DNA嵌合染料SYBR Green I为材料,采用设置重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA)特异性引物的手段,建立了一种快速、低成本、可视化的RPA用于转基因大豆‘B5C9123-5’的检测。结果表明,在靶标不存在时,RPA体系中游离的SYBR Green I染料使溶液呈现较弱的黄色荧光。在靶标存在的情况下,RPA扩增产生的双链DNA与SYBR Green I结合导致溶液从黄色转变为绿色并使荧光迅速增强。通过对RPA扩增时间和温度进行优化,阳性结果可在20min内用肉眼鉴别,检测限为1.00ng/μL。通过设置不同RPA引物,该方法可用于现场快速检测多种RNAi转基因作物。

关键词： RNAi转基因作物 重组酶聚合酶扩增 可视化检测 SYBR Green I

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植物氮素利用途径中硝酸盐转运基因的研究进展

刘文平; 梁烜赫; 张春宵; 李淑芳; 曹铁华; 李晓辉; 《中国土壤与肥料 》 2022 北大核心 CSCD

摘要：氮素是植物生长发育必不可少的大量元素之一,土壤中的硝酸盐是植物获取氮素的主要来源.植物对硝酸盐的吸收与利用是通过一个精密的信号调控网络来实现的,其中硝酸盐转运蛋白在植物体内硝酸盐的运输和分配过程中发挥着重要的作用.通过对氮素利用途径中不同硝酸盐转运基因在硝酸盐的吸收、转运、同化和再利用进行功能鉴定,可以更好地解析硝酸盐在植物体内的吸收机制,从而找到提高植物氮素利用效率的关键环节.因此,综述了植物硝酸盐转运蛋白对土壤中硝酸盐的响应和信号的传递;硝酸盐转运蛋白在植株体内参与硝酸盐的转运、储存和再利用的功能以及硝酸盐在植物育种中的应用,并从对硝酸盐转运基因的单碱基编辑、关键结构域的改造和基因功能鉴定等方面进行展望.综述了有利于揭示硝酸盐转运基因的功能,拓宽植物吸收转运硝酸盐的分子机制认识,为提高植物氮素利用效率、培育氮高效利用农作物品种提供理论支撑.

关键词： 植物 氮素 硝酸盐转运蛋白 硝酸盐 产量

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浅谈中国大豆品种改良与更新换代百年史

陈应志; 武婷婷; 白岩; 邱强; 杨中路; 程艳波; 鲍志猛; 《大豆科技 》 2022

摘要：2021年是中国共产党100周年华诞,全国种业届掀起了一股学党史农史、促种业振兴的热潮。作为我国重要的粮油饲兼用型作物—大豆,其品种的改良与应用推广,在发展我国畜牧水产业、改善人民生活质量、提高主产区豆农收入、实现第一个百年奋斗目标等方面发挥了重要作用。文中系统梳理了东北春大豆区、黄淮海夏大豆区和南方多熟制大豆区品种改良与更新换代的百年历史,期望起到“读史明智、鉴往知来”的作用。

关键词： 大豆 品种 改良 更新换代

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