荔枝快速碱化因子基因的克隆与表达分析

王家保; 贾彩红; 杨小亮; 金志强; 徐碧玉; 《热带作物学报 》 2009 CSCD

摘要：从已构建的荔枝果皮cDNA文库中挑取克隆测序,获得一条荔枝快速碱化因子(LcRALF)基因(GenBank登录号:EU024484)。该基因的cDNA全长为666bp,含1个381bp的开放读码结构,编码126个氨基酸。生物信息学分析表明,该基因的氨基酸序列与拟南芥、烟草等物种的RALF基因一致性较高,具有RALF基因氨基酸序列的典型特征。RT-PCR分析表明,该基因在荔枝果皮中特异表达,且在新采收的荔枝果皮中表达量最高。随着果皮的衰老该基因表达量逐渐下降。

关键词： 荔枝 果皮 快速碱化因子 基因克隆 基因表达

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橡胶树尖孢炭疽菌绿色荧光蛋白(GFP)标记转化株的获得

林春花; 刘先宝; 蔡吉苗; 李超萍; 李继锋; 黄贵修; 《热带作物学报 》 2009 CSCD

摘要：建立了根癌农杆菌介导转化橡胶树尖孢炭疽菌(Collectotrichum acutatum)获得T-DNA插入突变体的体系:在尖孢炭疽菌孢子浓度106个/mL、农杆菌浓度OD600=0.15～0.2后在200μmol/mL的乙酰丁香酮(AS)诱导6h,共培养48h,转化效率可达150～300个/106个分生孢子。获得的转化子通过PCR检测绿色荧光蛋白基因、Southern杂交验证、分生孢子的荧光观察,结果表明:被测转化子基因组中确实整合了目的片段,成功获得了橡胶树尖孢炭疽菌菌株CHY-1绿色荧光蛋白标记转化子。

关键词： 根癌农杆菌 尖孢炭疽菌 遗传转化 T-DNA 绿色荧光蛋白

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灌水量对橡胶园土壤铵态氮垂直分布的影响

许祥富; 林钊沐; 林清火; 华元刚; 《广东农业科学 》 2009 北大核心 CSCD

摘要：以尿素为氮源,在不同灌水量条件下分析土壤中铵态氮的分布特征,结果表明:随着灌水量的增加,土壤0～20cm铵态氮向下淋溶的量越大,不同的灌水量不影响淋溶到土壤80～100 cm土层的铵态氮的量。铵态氮可以在砖红壤中长时间保持较高含量。

关键词： 砖红壤 铵态氮 淋溶 灌水量

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结核分枝杆菌wbbL蛋白质可溶性表达及鉴定

邬强; 辛毅; 马郁芳; 《中国公共卫生 》 2009 北大核心 CSCD

摘要：目的优化结核分枝杆菌wbbL基因在大肠埃希菌中的表达,获得大量可溶性产物并加以鉴定。方法不同条件下诱导pET16b-wbbL质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达;建立外源重组蛋白质与分子伴侣在大肠埃希菌中的共表达体系,优化其表达条件;超声破碎诱导表达的大肠埃希菌,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物;免疫蛋白印迹(Western blotting)法对重组蛋白质进行鉴定。结果共表达体系优化表达的蛋白质主要以可溶性形式存在,经0.5 g/L L-阿拉伯糖30℃诱导5 h、0.5 mmol/L异丙酸-D-硫代半乳糖苷30℃诱导2 h时,可溶性目的蛋白的产量最多,占细胞蛋白总量的55.6%,且所表达的蛋白质为wbbL基因产物。结论在大肠埃希菌中成功表达出大量可溶性结核分枝杆菌wbbL蛋白质,为研究其酶促反应动力学特征以及建立完善的筛选抗结核药物的酶反应体系提供了基础。

关键词： 结核分枝杆菌 克隆 包涵体 蛋白质可溶性

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不同树龄橡胶树林地土壤有机碳含量与储量特征

吴志祥; 谢贵水; 陶忠良; 周兆德; 《热带作物学报 》 2009 CSCD

摘要：研究幼林早期(2龄)、幼林晚期(7龄)、开割树(16龄)和老龄即将更新树(30龄)4种不同树龄橡胶树林地的土壤有机碳含量与储量特征。结果表明:(1)不同树龄橡胶树林地各土壤层次土壤有机碳含量变化不大,但普遍表现为表层土壤(0～15cm土层)有机碳含量高于平均值,下层土壤(45～60cm土层)有机碳含量低于平均值,中间两层的(15～30cm土层、30～45cm土层)变化不大,在平均值的上下浮动;(2)不同树龄橡胶树林地土壤有机碳含量介于6.03～7.78g/kg之间,相互间存在显著差异,高低排序为幼林晚期(7龄)>老龄即将更新树(30龄)>幼林早期(2龄)>开割树(16龄);(3)胶林有机碳储量主要决定于其土壤有机碳含量和土壤容重,不同树龄橡胶树林地土壤有机碳储量介于61.33～74.29t/hm2之间,相互间存在差异,高低排序为老龄即将更新树(30龄)>幼林晚期(7龄)>幼林早期(2龄)>开割树(16龄)。

关键词： 不同树龄 橡胶林 土壤有机碳 含量 储量

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海南岛珍稀濒危植物

梁淑云; 杨逢春; 《亚热带植物科学 》 2009 CSCD

摘要：记录了海南岛典型热带珍稀濒危植物187种(不含兰科Orchidaceae和已公认灭绝的爪耳木Otophora unilocularis),隶属80科,其中裸子植物6科15种。将海南岛境内分布的桫椤科(Cyatheaceae)、蚌壳蕨科(Dicksoniaceae)、七指蕨科(Helminthostachyaceae)、水蕨科(Parkeriaceae)、苏铁科(Cycadaceae)、龙脑香科(Dipterocarpaceae)所有种全部列为典型热带珍稀濒危植物。

关键词： 海南岛 濒危植物 特有种

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根结线虫拮抗放线菌菌株DA07118的筛选与鉴定及其发酵条件的优化

曾庆飞; 李传浩; 黄惠琴; 方哲; 鲍时翔; 《中国生物防治 》 2009 北大核心 CSCD

摘要：从海南东寨港红树林、尖峰岭等原始森林及黄流地区发病蕉园采集土壤样品,分离得到215株放线菌菌株。以根结线虫为靶标线虫对215株放线菌进行筛选,获得18株对根结线虫校正死亡率在80%以上的菌株。菌株DA07118抗线虫活性最强,校正死亡率达100%;经5次继代培养,仍具有稳定产生杀线虫活性物质的能力。通过形态学、生理生化反应和16S rDAN分类鉴定,将该菌株归类为链霉菌属Streptomyces。进一步的发酵条件优化试验,确定该菌株产活性物质的最佳培养基配方为(g/L):麦芽糖10g、蔗糖25g、酵母膏20g、蛋白胨20g、K_2HPO_4 0.5g,初始pH7.0。发酵优化后,菌株发酵液的10倍稀释液处理后24h对根结线虫的校正击倒率从优化前的75.0%提高到93.7%。

关键词： 根结线虫 放线菌 筛选 菌株鉴定 发酵条件优化

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hGH-双精氨酸C肽人胰岛素原基因的克隆表达及纯化研究

胡兵; 黄超; 李文静; 邓柳红; 肖苏生; 张春发; 《生物技术通报 》 2009 北大核心 CSCD

摘要：旨在提高基因重组人胰岛素在大肠杆菌中表达的稳定性及表达包涵体蛋白的复性水平。在人胰岛素原N端前融合人生长素N端的一段序列来充当前导肽,同时将C肽设计为两个精氨酸,分10段合成长链寡核苷酸链,利用重叠延伸PCR技术(SOE PCR)扩增得到该基因片段。与表达载体PET-30a连接,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的融合蛋白采用Ni-NTA亲和层析纯化,纯化后的蛋白经复性、冻干等步骤后用胰蛋白酶,羧肽酶B双酶切再过DEAE Sepharose FastFlow阴离子交换柱,收集洗脱峰。对制备所得的胰岛素用SDS-PAGE,Western blot进行性质鉴定,及皮下注射小鼠测定生物活性。结果显示,目的蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中得到了表达,表达产物以不溶性包涵体形式纯在,约占大肠杆菌总蛋白的30%。经Ni-NTA亲和层析得到的重组蛋白纯度为85%,DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换纯化得到单组分胰岛素。Western Blot显示制备所得的胰岛素具有胰岛素免疫原性,皮下给药注射小鼠活性测定表明具有明显的降血糖活性。获得了一种高效生产基因重组人胰岛素的方法,为研究胰岛素类似物奠定了前期基础同时也为今后探索胰岛素的非注射给药途径提供了原料。

关键词： hGH-双精氨酸C肽人胰岛素原 重叠延伸PCR 融合蛋白表达 纯化 活性测定

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香蕉镰刀菌枯萎病4号生理小种研究进展

麦明晓; 黄惠琴; 鲍时翔; 《中国生物防治 》 2009 北大核心 CSCD

摘要：尖孢镰刀菌古巴专化型是引起香蕉镰刀菌枯萎病的病原菌,它有4个生理小种,其中4号生理小种出现最晚,但其危害性最大。本文就近年来香蕉镰刀菌枯萎病4号生理小种的分布与危害、生物学特征、致病机理、分子生物学研究、生物学防治等方面国内外的研究进行综述,并提出展望和设想。

关键词： 香蕉枯萎病 生理小种 研究进展

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斑翅食蚧蚜小蜂对寄主龄期的选择性

张方平; 符悦冠; 张敬宝; 韩冬银; 彭正强; 《中国生物防治 》 2009 北大核心 CSCD

关键词： 斑翅食蚧蚜小蜂 橡副珠蜡蚧 寄主龄期选择性

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