科研产出
同步检测7种鱼类病毒的扩增子拯救多重PCR(Arm-PCR)方法的建立和应用
《渔业科学进展 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：淋巴囊肿病毒(LCDV)、肿大细胞病毒属虹彩病毒(Mega)、赤点石斑鱼神经坏死病毒(RGNNV)、传染性造血器官坏死病毒(IHNV)、传染性胰脏坏死病毒(IPNV)、病毒性出血败血症病毒(VHSV)和传染性鲑鱼贫血症病毒(ISAV)是养殖鱼类主要的病毒性病原,危害巨大。为实现这7种病原的高通量、同步检测,本研究在分析这7种病毒基因序列的基础上,设计了9组扩增子拯救多重PCR(Arm-PCR)引物,并对扩增体系中的Taq酶、M~g(2+)、d NTP、Primer Mix浓度及退火温度等参数进行调整和优化,结合基因芯片检测技术,建立了同步检测7种鱼类病毒的Arm-PCR方法。优化后的Arm-PCR方法第一步PCR体系为:Taq酶(2.5 U/μl)1.0μl,10×PCR Buffer(含20 mmol/L的M~g(2+))5μl,d NTP(各2.5 mmol/L)5μl,10×Primer Mix(各2μmol/L)9μl,模板1μl,dd H2O补足至50μl,退火温度为56℃。研究结果显示,该方法可以在1支反应管内对上述7种病毒的9个致病基因同步进行扩增和检测,检测灵敏度分别为10~1copies/μl(RGNNV、VHSV、ISAV-NS、ISAV-MA)、10~2 copies/μl(LCDV、Mega、IHNV、IPNV)和10~3 copies/μl(大菱鲆红体病虹彩病毒,TRBIV)。该方法特异性强,与半滑舌鳎、石斑鱼、大菱鲆和牙鲆基因组DNA不产生交叉反应。本研究建立的可同步检测7种鱼类病毒的Arm-PCR方法具有高通量、高灵敏度、高准确性的优势,能有效提高工作效率,在鱼类病毒的筛查和流行病学调查领域有广泛的应用前景。
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0#柴油水溶性成分对黑鲷肝脏、鳃、肌肉组织中抗氧化酶活性的影响
《海洋渔业 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：采用室内实验方法,研究了不同浓度(0 mg·L-1、0.015 mg·L-1、0.03 mg·L-1、0.06 mg·L-1)0#柴油水溶性成分(WSF)对黑鲷(Sparus macrocephalus)肝脏、鳃和肌肉谷胱甘肽-S-转移酶(GST)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的影响。结果显示:(1)肝脏、鳃、肌肉和组织中GST活性与0#柴油具有明显的时间-效应和剂量-效应关系,肝脏组织中GST活性较肌肉和鳃组织中的更为灵敏;(2)各组织中SOD活性随时间和剂量的变化整体无明显规律;(3)肝脏组织中CAT活性先诱导后抑制,肌肉中始终被诱导,鳃中始终被抑制。CAT活性变化幅度不如GST明显。实验表明,黑鲷肝脏组织中GST更适合作为0#柴油污染响应的生物标志物,用作早期海洋石油污染的预警和监测的指标之一。
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一种基于Ⅱ型鲤疱疹病毒衣壳蛋白72的免疫学检测方法
《中国水产科学 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：Ⅱ型鲤疱疹病毒(cyprinid herpesvirus 2,Cy HV-2)是引起养殖异育银鲫(Carassius auratus gibelio)造血器官坏死症的致病病原。在临床筛查中基于病毒核酸的PCR和real time PCR技术已经建立,但是稳定性更强的免疫学诊断技术国内外尚无报道。本研究目的是利用Cy HV-2编码的ORF72基因(Gen Bank登录号:AFJ20502.1)所编码的衣壳蛋白作为捕获抗原,通过识别感染病毒的鱼体中的相应抗体,从而对样本进行临床免疫学检测。首先采用PCR方法从纯化的Cy HV-2基因组中扩增ORF72基因,并把该基因克隆至原核表达载体PGEX-4T-3,并转化到大肠杆菌中诱导表达,诱导表达的产物通过SDS-PAGE进行鉴定,对表达的重组蛋白进行纯化。用已纯化的72重组蛋白对小鼠进行免疫,制得72重组蛋白的抗体。Western blot检测表明所制备的多克隆抗体既能识别原核表达的重组蛋白,也可以识别Cy HV-2病毒粒子上的衣壳蛋白72。在上述基础上建立了基于Western blot技术的Cy HV-2抗体检测技术:用纯化的72重组蛋白作为检测抗原,鲫鱼血清用作一抗,兔抗鲫Ig M多克隆抗体作为二抗,酶标羊抗兔作为三抗鉴定鲫鱼是否存在Cy HV-2特异性抗体。在对急性感染期的临床样本检测中,本方法能在所有样本中检测出ORF72特异性抗体存在,表明72重组蛋白作为相应抗体捕获原可以用于确诊鲫鱼是否感染Cy HV-2。本研究建立的实验室免疫学检测方法为商品化免疫学检测技术的开发奠定了基础,对Cy HV-2的检验检疫具有一定的临床应用价值。
关键词： Ⅱ型鲤疱疹病毒 ORF72 原核表达 多克隆抗体 临床检测 异育银鲫
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四川裂腹鱼脑型芳香化酶Cyp19b基因组织分布及温度对其表达水平的影响
《动物学杂志 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：为研究脑型芳香化酶基因Cyp19b在四川裂腹鱼(Schizothorax kozlovi)早期性别分化中的作用,采用RACE方法从四川裂腹鱼脑中扩增得到该基因c DNA全长序列,并应用荧光定量RT-PCR技术测定该基因m RNA的相对表达量,探讨该基因在不同规格四川裂腹鱼鳃、脑、心、肝、脾、肾、肌肉、精巢、卵巢组织中的表达差异,以及温度对其早期仔鱼阶段该基因表达的影响。四川裂腹鱼Cyp19b基因的c DNA全长序列共3 021 bp,共编码507个氨基酸,属于脑型芳香化酶基因;四川裂腹鱼Cyp19b基因编码的氨基酸序列与其他鱼类脑型芳香化酶基因编码的氨基酸序列同源性可达70%以上,而与性腺型芳香化酶基因编码的氨基酸序列同源性较低,为64%左右;四川裂腹鱼Cyp19b基因仅在脑组织中表达,具有比较高的组织特异性,且随着个体的增长,逐渐呈现显著的雌雄差异;对不同温度处理12日龄仔鱼6 d后,低温(10℃和14℃)能显著促进Cyp19b基因表达量的升高,但高温(26℃)却对其表达量无显著影响。由此推测,脑型芳香化酶基因Cyp19b可能在低温导致四川裂腹鱼雌性化过程中发挥着重要作用。
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酒糟罗非鱼间歇真空糟制工艺研究
《南方水产科学 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：该研究以罗非鱼(Oreochromis mossambicus)为原料制作酒糟鱼,采用间歇真空糟制技术研究盐腌时间、预干制条件与间歇真空糟制条件对酒糟鱼品质的影响。结果表明,采用15%的盐水腌制13 h、50℃热风干燥11 h、间歇真空干燥温度为25℃、糟制6 d、真空度为0.095 MPa条件下,所得产品甜咸适宜、色泽较好,总糖质量分数为(596.93±1.63)μg·g~(-1),总酸质量分数为(123.95±0.53)mg·g~(-1),氨基态氮质量分数为(1.98±0.15)g·kg~(-1),品质优于其他条件下所制得的产品。
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中国现代海洋渔业产业体系的构建——基于渔业效益指标的评价
《经济研究参考 》 2016 北大核心
摘要：科学开发和保护海洋资源,促进海洋渔业可持续发展,发展现代海洋渔业,是我国农业现代化建设的重要战略加快转变发展方式,合理开发利用海洋渔业资源,加强海洋环境保护,促进海洋生态修复,走产出高效、产品安全、资源节约、环境友好的现代海洋渔业发展之路。那么,如何科学发展现代海洋渔业呢?本文结合经济合作与发展组织、联合国粮食与农业组织以及Anderson et al(2015)等开发的基于不同渔业管理目标的渔业效益指标体系,结合中国海洋渔业、渔村、渔民、渔船等现实状况,分析了如何通过渔业效益指标科学、定量评价中国现代海洋渔业产业体系,从而为将来全国海洋渔业产区、全面的、连续的渔业效益指标评估数据跟踪与监测,分析、评价现代海洋渔业发展阶段,探寻中国现代海洋渔业的成功与不足,为我国海洋渔业管理部门进一步制定政策、《渔业法》修法及完善等提供科学依据和可操作的政策依据。
关键词： 现代海洋渔业 产业体系 可持续发展 渔业效益指标 投入与产出
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液相色谱串联电喷雾质谱检测中溶剂对硝基呋喃类代谢物响应的影响
《南方水产科学 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：通过对比不同溶剂对液相色谱串联电喷雾质谱检测硝基呋喃类代谢物灵敏度的影响,以筛选最佳的流动相和上机溶液。Q1扫描时,AHD在负离子模式下有最高的响应强度。正离子模式检测时,甲醇中添加0.1%的氨水,4种化合物均能获得令人满意的灵敏度。用液相色谱串联正电离电喷雾质谱检测时,以甲醇和0.1%的氨水作为流动相,上机溶液中也添加0.1%的氨水,灵敏度高,杂质干扰少,准确度好,能够较好地满足鱼、虾、蟹等复杂样品基质中痕量硝基呋喃类代谢物残留检测的需要。
关键词： 硝基呋喃类代谢物 高效液相色谱-串联质谱法 检测灵敏度 优化
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饲料中添加红景天对吉富罗非鱼耐低温特性的影响
《淡水渔业 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：实验采用高山红景天(Rhodiola sachalinensis)作为饲料添加剂,探究其对低温胁迫下的吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus,GIFT)的影响。将0.1%、0.2%、0.4%的高山红景天水煎剂粗提干粉分别添加到基础饲料(对照组),用4种实验饲料投喂吉富罗非鱼54 d,然后进行低温胁迫处理并于30、25、20、15和10℃时分别取样。结果显示:水温为10℃时,添加组的成活率为100%,显著高于对照组,添加组血清中的血糖、高密度脂蛋白胆固醇、一氧化氮浓度和肝脏中的丙二醛水平较对照组显著降低;肝脏中的超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的酶活性水平较对照组显著升高,并且添加水平越高,效果越明显。以上结果说明,饲料中添加0.1%的高山红景天粗提干粉即能对提高罗非鱼的抗低温能力起到一定的积极作用,添加0.2%和0.4%的效果更好。
关键词： 吉富罗非鱼(GIFT,Oreochromis niloticus) 高山红景天(Rhodiola sachalinensis A.Bor.) 低温胁迫 添加剂
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不同变温幅度对施氏鲟幼鱼消化酶、代谢酶及抗氧化酶活性影响
《东北农业大学学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：为研究不同变温条件下施氏鲟幼鱼消化酶活性和血清生化指标变化情况,试验设置一个恒温对照组(22±0)℃和四个变温组(22±1)℃、(22±2)℃、(22±3)℃及(22±4)℃,每组4个重复,每个重复15尾鱼,养殖周期42 d。结果表明,与对照组相比,(22±3)℃组十二指肠和瓣肠淀粉酶,十二指肠蛋白酶活性均显著降低(P<0.05)。各试验组与对照组相比,十二指肠脂肪酶活性无显著差异(P>0.05),但(22±3)℃组和(22±4)℃组脂肪酶活性显著低于(22±1)℃组(P<0.05)。各试验组瓣肠脂肪酶活性均显著低于对照组(P<0.05)。(22±2)℃组和(22±3)℃组瓣肠蛋白酶活性均显著高于对照组(P<0.05),其他组与对照组差异不显著(P>0.05)。各组超氧化物歧化酶(SOD)和黄嘌呤氧化酶(XOD)活性均无显著差异(P>0.05)。(22±1)℃组谷草转氨酶(AST)活性显著高于对照组(P<0.05),而(22±4)℃组AST活性显著低于对照组(P<0.05)。(22±1)℃组、(22±2)℃组和(22±4)℃组谷丙转氨酶(ALT)活性显著高于对照组(P<0.05)。(22±2)℃组总抗氧化能力(T-AOC)显著高于对照组和其他各试验组。综上,(22±2)℃变温模式可显著提高瓣肠蛋白酶活性,同时提高代谢酶活性和抗氧化能力。
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金枪鱼电浮标卫星通讯与数据压缩实现
《渔业现代化 》 2016 北大核心
摘要：针对目前海上渔船与流放在海面的浮标远距离通讯传输时存在信息易丢失、通讯费用高以及数据显示终端不够友好等诸多问题,对卫星通讯终端(IDP)的数据结构与哈夫曼压缩算法展开研究。采用图像分级式哈夫曼编码压缩方法,利用卫星信号收发服务器提供中转,对卫星回传的40组典型数据进行编码解码试验。结果显示,通讯数据流量最高压缩比达到0.58,平均节省通讯成本40%,客户端人机界面友好,实现卫星定位与浮标各项参数的实时显示,控制命令延迟时间仅为5 s。最终将压缩算法部署在卫星通讯终端并实时接收远程数据后,控制命令收发数据包完整、无丢帧,声呐探测图像清晰可辨,数据包压缩效果显著,达到了预期效果。此浮标已经应用至南海部分金枪鱼围网渔船,渔船可以通过船载客户端与浮标实现有效通讯并实时接收金枪鱼鱼情信息,通讯成本在可接受范围内。
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