陆地棉黄萎病菌诱导抑制消减杂交cDNA文库的构建与分析

张映霞; 杨郁文; 倪万潮; 曹祥荣; 沈新莲; 《江苏农业学报 》 2008 北大核心 CSCD

摘要：为探明棉花黄萎病抗性的相关基因,对本实验室的一个高抗黄萎病陆地棉材料进行抑制消减杂交(SSH),以黄萎病菌诱导后48 h和未诱导的植株分别作为Tester和D river,提取总RNA并分离mRNA,通过合成cDNA双链及两次PCR扩增,富集诱导后植株中差异表达的片段。对两次PCR后的产物纯化,连接并转化到大肠杆菌中完成文库构建,共获得了434个阳性克隆。对插入片段进行PCR扩增后发现大小从0.45 kb到0.70 kb不等。指纹图谱分析将所有克隆分为20类,于每一类中取1个克隆进行测序分析。BLAST分析表明大部分克隆片段与其他病原菌诱导缩减库中的EST相似。缩减片段编码的蛋白与拟南芥的P450单加氧酶、病程相关蛋白、类甜蛋白以及几丁质酶等相似。此cDNA文库的建立为进一步分析基因的差异表达及分离抗黄萎病基因奠定了基础。

关键词： 棉花 黄萎病 抑制消减杂交 cDNA文库

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陆地棉子叶离体培养诱导不定芽植株再生

许亚楠; 佘建明; 张保龙; 沈新莲; 倪万潮; 《江苏农业学报 》 2008 北大核心 CSCD

摘要：以陆地棉种子无菌苗的子叶为外植体材料,研究不同苗龄的子叶、激素组合、硝酸银等对子叶诱导不定芽的影响。试验结果:15 h苗龄的子叶,在附加BAP 3.0 mg/L、IAA 1.0 mg/L、2ip 1.0 mg/L和AgNO35.0 mg/L的不定芽诱导培养基上,珂字棉312和泗棉3号的不定芽诱导频率分别为70%和60%左右。

关键词： 陆地棉 子叶 离体培养 不定芽 植株再生

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低谷蛋白含量水稻种质的筛选

王艳平; 汤陵华; 方先文; 张勇; 《江苏农业学报 》 2008 北大核心 CSCD

关键词： 谷蛋白含量 水稻 种质资源

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辣椒高赖氨酸蛋白基因Cflr全长cDNA的克隆及其组织表达特征

孙晓波; 房瑞; 余桂红; 刘全兵; 马鸿翔; 《园艺学报 》 2008 北大核心 CSCD

摘要：为了在茄科植物中寻找新的高赖氨酸蛋白基因,以辣椒栽培种‘江蔬7号’的成熟花粉为材料,根据马铃薯和番茄中高赖氨酸蛋白基因的保守序列设计引物,通过RT-PCR技术扩增到一条长390bp的cDNA片段,继而应用RACE技术克隆了一个辣椒高赖氨酸蛋白基因的全长cDNA,命名为Cflr(Gen-Bank登录号:EU367999)。Cflr基因cDNA全长920bp,5′端有84bp的非翻译区,3′端具有完整的polyA尾,包含一个编码223个氨基酸的完整开放阅读框。Cflr基因与马铃薯和番茄高赖氨酸蛋白基因cDNA序列的同源性为50%~60%,氨基酸序列的同源性为40%~50%。该基因所编码的蛋白质中赖氨酸含量为21.2%,苏氨酸含量为10.3%,是目前已知赖氨酸含量最高的天然蛋白。半定量RT-PCR结果表明,Cflr基因在辣椒未成熟花药、成熟花粉、花瓣、茎、叶片和根中均有表达,在成熟花粉和花瓣中的表达丰度最高,在叶片中表达量明显减少,而在未成熟花药、茎和根中的表达量极少。

关键词： 辣椒 高赖氨酸蛋白基因 RACE 组织表达特征

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一株新城疫病毒分离株全基因组序列的克隆与分析

魏雪涛; 李银; 刘宇卓; 张敬峰; 《江苏农业学报 》 2008 北大核心 CSCD

摘要：根据GenBank上所公布的新城疫病毒(NDV)的全基因组序列,设计了10对引物,运用RT-PCR方法获取了三黄鸡新城疫病毒(SHJ00株)全基因组序列,并对其进行了比较分析。结果表明:此株三黄鸡新城疫病毒(SHJ00)的全基因组序列由15 192个碱基组成,在NP基因和P基因之间的非翻译区多了6个核苷酸ACACTC;与NDV一致,SHJ00基因由6个ORF组成,即3′-NP-P-M-F-HN-L-5′;测序后拼接的F基因长1 672 bp,包含完整的开放阅读框(1 662 bp),编码553个氨基酸,F蛋白裂解位点的氨基酸顺序为112R-R-Q-K-R-F117,具有强毒株序列特性;根据NDV基因分型标准,三黄鸡新城疫病毒SHJ00株归属基因Ⅶ型新城疫病毒;F基因与国内外NDV代表株的核苷酸同源性为80.9%~97.7%,其中与F48E9同源性为84.3%,与Lasota的同源性为82.0%;测序后拼接的HN基因长为1 716 bp,编码571个氨基酸,与国内外NDV代表株的核苷酸同源性为80.0%~98.1%,其中与F48E9同源性为84.5%,与Lasota的同源性为81.4%。

关键词： 新城疫病毒 全基因组 测序与分析

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转sbk和sck抗虫基因水稻的获得

张启军; 吕川根; 夏士健; 宗寿余; 漆庆明; 虞德容; 孙永华; 《分子植物育种 》 2008 CSCD

摘要：转入多个抗虫基因是解决水稻抗虫的一条有效途径。本研究采用根癌农杆菌介导法将2个抗虫基因(sbk和sck)同时转入3个水稻品种中,通过一系列的分子检测(PCR和RT-PCR)分析,这2个基因已经成功转入3个水稻品种中并得到了表达;同时还获得1株不含抗生素筛选标记基因(hpt)和抗虫sbk基因,却含抗虫sck基因的转基因植株,命名为YJ27-5sck。用该植株作为供体,通过杂交将sck抗虫基因转育到另外5个水稻品种中且同样得到了表达,获得了不含筛选标记基因的转sck基因阳性植株。

关键词： 水稻 抗虫基因 转基因植株 基因表达

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产细菌素乳酸菌的筛选及鉴定

姚丽娅; 徐为民; 诸永志; 王道营; 汪志君; 《食品工业科技 》 2008 北大核心 CSCD

摘要：从传统发酵制品中分离筛选到50株乳酸菌,通过琼脂扩散法从中筛选出5株对指示菌具有明显抑菌作用的菌株,通过排除酸和过氧化氢的作用后,其中一株菌仍具有一定的抑菌活性。用胰蛋白酶对其发酵液进行处理后,活性下降很大,说明代谢产物中含有蛋白性质的抑菌物质,可能是细菌素。对此菌株进行鉴定,初步认为是戊糖乳杆菌,并对其生长能力和产酸能力进行了测定。

关键词： 乳酸菌 细菌素 筛选 鉴定

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江苏省杂交粳稻区域试验组合的品质和抗性分析

张亚东; 阙金华; 吉健安; 朱镇; 赵凌; 陈涛; 王才林; 《江苏农业学报 》 2008 北大核心 CSCD

摘要：以2004~2006年江苏省杂交粳稻区域试验资料为依据,对杂交粳稻区域试验组合的品质性状和抗性表现进行分析,结果表明:江苏省杂交粳稻品质性状的优质达标率偏低,其中杂交晚粳稻为41.83%,比杂交中粳稻高30%;各品质性状优质达标率表现为糙米率>胶稠度>直链淀粉含量>垩白度>整精米率>垩白粒率,垩白性状和整精米率达标率低是限制江苏省杂交粳稻品质提高的主要原因。总体上看,江苏省杂交粳稻抗性表现不理想,稻瘟病抗性存在对个别小种高感而同时对其它小种免疫的现象,对鉴定的各优势小种都免疫的组合不多;杂交晚粳对稻瘟病和纹枯病的抗性略优于杂交中粳;对白叶枯病4个鉴定小种都免疫的组合几乎没有,或多或少对鉴定小种中的某些小种表现感病;条纹叶枯病抗性杂交中粳稻明显优于杂交晚粳稻。针对上述问题,提出江苏省杂交粳稻育种对策,应在保持现有产量水平的基础上,改良稻米的垩白粒率和整精米率,重视食味品质,提高杂交粳稻的综合抗病性,增强江苏杂交粳稻组合的综合竞争力。

关键词： 杂交粳稻 区域试验 品质 抗性

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猪肺炎支原体P46基因的克隆及表达

迟灵芝; 刘茂军; 冯志新; 单虎; 邵国青; 《江苏农业学报 》 2008 北大核心 CSCD

摘要：参考GenBank登录的猪肺炎支原体(Mhp)P46基因序列,利用Primer 5.0软件设计合成引物,通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)对猪肺炎支原体P46基因的3个位点进行定点突变,将此突变基因插入到表达载体pET-32a(+)中,经IPTG诱导后成功地在大肠杆菌Rosetta(DE3)宿主菌中表达分子量约为63500的融合蛋白。West-ern blotting分析表明,该融合蛋白具有较好的免疫原性。为猪肺炎支原体抗体ELISA检测方法的建立奠定了基础。

关键词： 猪肺炎支原体 重叠延伸PCR 定点突变 表达

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万寿菊花酶助青贮工艺及其酶活性分析

李大婧; 刘春泉; 方桂珍; 《农业工程学报 》 2008 EI 北大核心 CSCD

摘要：针对万寿菊花(Tageteserecta)制备叶黄素的传统生产方法中叶黄素损失较多的情况,提出一重酶助青贮处理万寿菊花生产叶黄素的方法。以叶黄素的提取率为指标值,确定青贮过程的工艺参数,在水-有机溶剂共存体系分析了酶的活性。试验结果表明:青贮和烘干过程叶黄素都有损失,在烘干过程损失(16.33%)比青贮过程损失(6.55%10.27%)更多。在青贮阶段添加β-葡聚糖酶或液态纤维素酶30℃青贮5d,可以很好的降解植物细胞壁,利于叶黄素的提取。分别以万寿菊花冻干粉、青贮鲜花为原料,在水-有机溶剂共存体系确定提取过程所需要的最适水量分别为6.8、2.8～3.8mL/g,保证了该体系中较好的酶活性,能够降解植物细胞壁使水解顺利进行。采用对照试验发现在酶-水-有机溶剂共存体系中纤维素酶仍然具有较高活性。

关键词： 万寿菊花 酶助青贮 叶黄素 提取 酶活性

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