茉莉酸刺激的橡胶树胶乳cDNA消减文库的构建及其序列分析

曾日中; 段翠芳; 黎瑜; 郝秉中; 《热带作物学报 》 2003 CSCD

摘要：采用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术,构建了外源茉莉酸刺激条件下橡胶树胶乳与未处理橡胶树胶乳差异表达的cDNA消减文库,经蓝白斑筛选共得到121个含有插入片段的阳性克隆。通过菌落PCR的方法分别对阳性克隆的插入片段进行扩增,结果表明,95％左右阳性克隆插入片段的大小在200-600 bp之间。随机选取25个克隆进行测序,并对所得的25条表达序列标签(EST)序列用Blastn(基本局域联配搜寻工具)检索基因文库(genbank),其中10条EST片断可找到碱基序列相似性大于80％以上的同源基因序列,其余15条EST为没有任何功能线索的未知序列。外源茉莉酸刺激条件下橡胶树胶乳cDNA消减文库的构建和在此基础上克隆橡胶树胶乳中JA信号的候选应激基因,将为开展茉莉酸调控橡胶树胶乳代谢和橡胶生物合成的分子机理研究打下基础。

关键词： 橡胶树 胶乳 茉莉酸 抑制性消减杂交 cDNA消减文库

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柱花草的组织培养及植株再生

蒋昌顺; 邹冬梅; 张义正; 《植物生理学通讯 》 2003 北大核心 CSCD

摘要：1 植物名称 柱花草(Stylosanthes guianensis)热研2号。2 材料类别 种子长成的无菌苗的真叶。3 培养条件 (1)种子萌发培养基:MS培养基。(2)愈伤组织诱导培养基:MS+6-BA 4.0 mg·L~(-1)(单位下同)+NAA 1.0。(3)丛生芽诱导培养基:MS+6-BA 4.0+NAA 0.01。(4)芽伸长培养基:

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毕赤氏酵母/hGM-CSF工程菌的构建及表达分析

杨国峰; 周鹏; 张泰芳; 《药物生物技术 》 2003 CSCD

摘要：为了探索利用毕赤氏酵母系统表达和生产人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,hGM-CSF)的可行性,使用经改造的hGM-CSF基因构建pGAPZa-A/hGM-CSF分泌型表达载体,转入毕赤氏酵母SMD1168(his 4,pep 4)菌株和GS115(his 4)菌株,利用斑点杂交技术筛选hGM-CSF基因阳性菌株,利用SDS-PAGE和TF-1依赖细胞株/MTT比色法对工程菌株的分泌产物进行表达和生物活性分析,最后筛选得到7个hGM-CSF基因阳性菌株,其中有3个工程菌株的杂蛋白较少且主带蛋白质相对分子质量与经改造的hGM-CSF基因相对分子质量保持一致,这3个工程菌株的分泌蛋白质样品都具有天然hGM-CSF的生物活性,经初步提取,活性单位分别为2.28×105U/ml、2.22×105U/ml和2.46 × 105U/ml。从而证明利用毕赤氏酵母系统表达hGM-CSF是可行的,为hGM-CSF的生产和临床应用打下了基础。

关键词： hGM-CSF 毕赤氏酵母 载体构建 表达分析

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以农杆菌为介导花生遗传转化研究

单世华 ; 李春娟 ; 刘思衡 ; 官德义 ; 林俊芳 ; 庄伟建; 《中国油料作物学报 》 2003 北大核心 CSCD

摘要：应用花生丛生芽再生体系 ,以农杆菌为介导将含有几丁质酶和 β - 1,3-葡聚糖酶抗病基因的植物双价表达载体 pCGⅡ转入花生品种泉花 10号和金花 10 12 ,获得转基因植株 ,并已通过PCR和Southernblot鉴定。研究表明 ,侵染时间以 5～ 15min的效果较好 ,侵染时间过长不利于提高转化率 ;0～ 1d预培养对基因转化有利 ,预培养2d可使转化率下降。

关键词： 花生 农杆菌介导 丛生芽 基因转化

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菠萝果重与营养器官的相关性分析

陈业渊; 杨连珍; 邓穗生; 魏守兴; 沈奕德; 《热带作物学报 》 2003 CSCD

摘要：用回归和相关分析法对菠萝果重与营养器官的相关性进行了研究。结果表明:菠萝果重与茎叶重量的相关关系达到极显著水平。茎叶越重,果实就越大越重。果重与裔芽数、裔芽重量、吸芽数、吸芽重和冠芽重等营养芽均呈正相关,其中,果重与裔芽重关系最为密切,与裔芽数次之,都达极显著水平;但在排除茎叶重的影响后,对果重与营养芽的关系进行偏相关分析表明,果重与冠芽重、裔芽数、裔芽重、吸芽数、吸芽重均未达到显著的相关水平。在茎叶重一定的情况下,果重与裔芽数、裔芽重量和吸芽重及冠芽重的关系不大。不同菠萝种类、不同杂交种其营养芽的数量不等。大果类型其营养芽的数量明显少于小果类型,应是一种遗传特性;此外,裔芽与吸芽间存在负相关关系。因此,在菠萝生产中除芽是否能达到显著增产,有待进一步研究。

关键词： 菠萝 营养器官 单果重 相关性

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橡胶芽接树砧木与接穗在生化上的相互影响

黄国涛; 林位夫; 《热带作物学报 》 2003 CSCD

摘要：以橡胶树自根无性系海垦2和热研88-13自接和互接组成的芽接树为材料,在不同割胶条件下,采用PAGE和SDS-PAGE技术,分析了砧木和接穗的胶乳酯酶同工酶和过氧化物酶同工酶以及可溶性蛋白等生化因子。结果表明:砧木和接穗之间在酯酶同工酶谱C区存在显著的相互影响,这种影响不因割胶时间和乙烯利刺激而变化:自接和互接树之间的过氧化物酶同工酶谱和可溶性蛋白图谱均表现一致,未观测到砧木与接穗之间在这2种图谱上的相互影响。

关键词： 橡胶树 砧木 接穗 同工酶 可溶性蛋白 相互影响

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机械伤害和外施茉莉酸对巴西橡胶树次生乳管分化的局部效应及其与茉莉酸分布的关系(英文)

田维敏; 史敏晶; 于凤义; 吴继林; 郝秉中; 崔克明; 《ActaBotanicaSinica 》 2003 CSCD

摘要：采用同位素示踪技术和实验形态学的方法揭示茉莉酸在木本植物巴西橡胶树(HevcabrasiliensisMull,Arg.)中的分布和运输的特点,并分析其与机械伤害和外施茉莉酸对巴西橡胶树次生乳管分化的诱导效应之间的关系。外施的茉莉酸进入体内后,在较长时间内大部分集中在施用部位。机械伤害阻止外施的茉莉酸进入体内,同时,又使进入的茉莉酸阻滞在受伤部位的附近。与茉莉酸在草本植物中可以向上和向下运输的情况不同,茉莉酸在木本植物巴西橡胶树中主要是向下运输的。机械伤害和外施茉莉酸对巴西橡胶树次生乳管分化的诱导效应是局部的,只在受伤和施用茉莉酸部位的树皮中诱导次生乳管的形成。机械伤害削弱外源茉莉酸对次生...

关键词： 巴西橡胶树 茉莉酸 机械伤害 同位素示踪 乳管分化

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酸性硫酸盐土壤上施用磷矿粉对水稻养分有效性的影响

臧小平; 张承林; 孙光明; 郑少玲; 严小龙; 《植物营养与肥料学报 》 2003 北大核心 CSCD

摘要：1998～2001年在已垦和未垦酸性硫酸盐土壤上连续进行6季作物的磷矿粉肥效试验,4种磷矿粉分别为摩洛哥CALCINE和BRUT,ALGERIA及昆阳磷矿粉,另外加上过磷酸钙和重过磷酸钙及对照。2000年起每小区均分成2个裂区,其中裂区Ⅰ继续按以前磷肥用量施肥,裂区Ⅱ则将后4季作物的肥料1次施下。试验结果表明,在未垦地上,施用磷矿粉处理水稻稻草P含量比对照显著提高,植株吸收N、P、K量、土壤含P量显著增加。磷矿粉为水稻生长提供了稳定有效的P源;水稻根部吸收P并主要储存于稻草中;2种施用方法无显著差异。已垦地上各处理间无显著差异。虽然缺P是制约水稻生长的一个关键因素,但在此类土壤上还存在更多的限制因子。

关键词： 磷矿粉 水稻 酸性硫酸盐土壤 养分有效性

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氮、磷肥用量对坚尼草种子产量的影响

韦家少; 《热带作物学报 》 2003 CSCD

摘要：采用L16(43)正交设计,进行氮、磷肥不同用量对坚尼草不同品种的种子产量影响的试验,结果表明:在16个处理组合中,以热研9号施氮肥225kg·hm-2、磷肥375kg·hm-2的处理组合单位面积产量最高,达671.5kg·hm-2;其次为热研9号施氮肥375kg·hm-2、磷肥225kg·hm-2的处理组合,产量为584.8kg·hm-2。品种单产高低的排序是:CIAT604>热研9号>热研8号>青绿黍;氮肥用量单产高低排序是:225>357>112.5>0kg·hm-2;磷肥则是:357>225>0>112.5kg·hm-2。

关键词： 坚尼草 施肥 种子产量

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抗真菌蛋白Rs-AFP_2基因定点突变及其对大肠杆菌中表达的影响

朱建清; 刘柱; 胡新文; 杨志荣; 《高技术通讯 》 2003 EI CSCD

摘要：为了研究遗传密码子对表达调控的影响,利用PCR重叠延伸法,对萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP2基因编码序列区的部分核苷酸进行沉默突变,构建突变体Rs-AFPm。序列分析表明,PCR产物全长240bp,有一个阅读框,编码的蛋白由29个氨基酸的信号肽和51个氨基酸的抗真菌蛋白组成。突变体与突变前的Rs-AFP2基因相比,在编码区第3号氨基酸Lys相差一个碱基(TTG→TTA),第5号氨基酸Gln相差一个碱基(CAG→CAA),第6号稀有密码子Arg相差两个碱基(CAG→CGA)。重新合成引物,将切除信号肽的Rs-AFP2基因和Rs-AFPm基因与原核表达载体pET-21b(+)分别重组到大肠杆菌BL21菌株。IPTG诱导后,二者均得到了表达。软件分析显示,突变前pETAFPo表达产物占全菌蛋白的3％,突变后pETAFPm的表达产物占全菌蛋白含量的8％;表达蛋白主要以包涵体的形式存在,包涵体经超声波破碎后,蛋白质复性,抑菌结果表明,pETAFPm表达产物的抑菌半径大于pETAFP2表达产物的抑菌半径。这些都说明改造后的Rs-AFPm基因与Rs-AFP2基因相比,已有效地提高表达量。

关键词： 萝卜抗真菌蛋白(Rs-AFP_2) 定点突变 密码偏爱性 表达

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