科研产出
南沙群岛西南大陆斜坡海域浮游动物的垂直分布
《海洋学报(中文版) 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：浮游动物是海洋生态系统物质和能量转移的关键环节,也是渔业资源的重要饵料,其种类组成和数量分布均有明显的垂直分层现象。利用2011年4月在南沙群岛西南大陆斜坡海域开展的18个站点90份样品的调查数据,对该海域浮游动物的垂直分布进行了研究,表明:(1)该海域浮游动物种类组成丰富,共出现18个类群580种(类);(2)浮游动物种类组成垂直变化明显,特定水层出现的种类数占总种数的43.6%,各水层均出现的种类仅占总种数的15.8%;(3)优势种组成复杂,垂直变化明显,单一种类的优势度不高;(4)浮游动物平均密度和湿重生物量分别为206.27ind/m3、94.03mg/m3,密度和生物量均以0~2m层和30~75m层较高,沿水深梯度的变化呈明显的双峰型;(5)浮游动物数量的垂直变化主要受温跃层影响,温跃层内浮游动物数量最高,温跃层上方和下方的水层内数量较低;(6)南沙西南大陆斜坡区浮游动物生产力水平较高,表明该海域渔业资源有一定的开发潜力。
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异源和同源dmrt1基因过表达载体在青鳉体内的整合和表达
《中国水产科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：利用半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)dmrt1基因和青鳉(Oryzias latipe)dmrt1基因构建过表达载体,采用显微注射技术将两种载体分别导入青鳉受精卵中,比较异源和同源dmrt1基因对青鳉胚胎孵化率的影响以及两种dmrt1基因在青鳉体内的基因整合率、基因表达率及对芳香化酶基因(cyp19a)表达的影响。结果表明,注射48 h后,两种载体均在胚胎内大量表达,注射青鳉同源性dmrt1载体的受精卵孵化率(69.5%)要显著高于注射异源性dmrt1载体的受精卵(36.5%)。30 dph(days post hatching)两组被注射稚鱼均能检测到基因整合,注射同源dmrt1的整合率(30%)要高于异源dmrt1(10%)。30 dph稚鱼体内检测不到异源性dmrt1载体的表达,但能检测到同源dmrt1载体的mRNA表达,同时芳香化酶基因的表达受到了抑制。本研究为研究舌鳎性别分化相关基因功能提供了基础,并为在模式鱼类中研究海水鱼相关基因功能累积了必要的资料。
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罗非鱼无乳链球菌C5a肽酶(ScpB)的原核表达及其免疫原性
《中国水产科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：以尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)为鱼体样本,克隆了罗非鱼源无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)scpB基因,构建了原核表达质粒pET32a(+)-scpB,转入大肠杆菌BL21(DE3)后,IPTG诱导表达,表达的重组蛋白经镍离子金属螯合柱纯化及超滤管浓缩后,进行SDS-PAGE和Western blot分析鉴定。纯化的重组蛋白以不同剂量(1μg/g、3μg/g、5μg/g)免疫尼罗罗非鱼后,每周检测各实验组鱼体血清非特异性免疫指标[溶菌酶活性、超氧化物歧化酶(SOD)活力]及抗体水平变化情况,并于免疫4周后以4倍LD50的剂量对其进行人工攻毒。结果显示,该重组蛋白在大肠杆菌中以包涵体的形式存在;对尼罗罗非鱼的相对免疫保护率为69.66%~89.00%,其中5μg/g组的相对保护率最高;受免鱼体血清中溶菌酶活性、SOD活力和抗体水平较对照组有极显著提高(P<0.01),结果表明,重组蛋白ScpB具有较强的免疫原性和保护作用。本研究旨在为GBS多肽疫苗的研制奠定基础。
关键词： 罗非鱼 无乳链球菌 C5a肽酶 原核表达 免疫原性
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镂空方型增殖礁上升流特性的粒子图像测速试验
《农业工程学报 》 2014 EI 北大核心 CSCD
摘要：利用粒子图像测速技术(particle image velocimetry)对镂空方型增殖礁单体礁和组合礁的上升流流场特性进行分析,按照海区实测流速和礁区选址要求,设定5个不同的来流速度0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 m/s,并计算出试验流速分别为0.045、0.090、0.135、0.180、0.225 m/s。结果表明:单体礁在任何一种迎流方式下,上升流的规模都随来流速度的增加而增大;而相同来流速度下,主视面90o迎流时,上升流规模最大;单体俯视面45o迎流时,上升流规模最小;礁体横向组合排列时,礁体间距在0.5L~1.0 L时所产生的上升流规模最大,礁体间的协同作用最强;礁体纵向组合排列时,在0.5L~1.5 L倍的间距时,礁体间的相互作用较强,形成的上升流规模最大。
关键词： 水产养殖 水流 试验 图像粒子测速 上升流特性 镂空方型增殖礁
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半滑舌鳎线粒体DNA含量测定方法的建立与优化
《中国水产科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：本研究旨在应用实时荧光定量PCR技术,建立半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)线粒体DNA(mtDNA)含量测定方法并进行优化。通过质粒标准品的线性化处理、模板DNA的酶切和超声处理、mtDNA和核DNA(nDNA)基因引物的筛选实验,建立半滑舌鳎mtDNA含量测定方法。结果表明,质粒标准品的构象对荧光定量PCR标准曲线影响较大,线性化的质粒更适合用作标准品;酚-氯仿方法提取的模板DNA适用于mtDNA含量测定,无需进行预处理;用D-loop和ND1这2对引物所得的拷贝数较小且结果一致,适用于mtDNA拷贝数的测定;以不同核基因为参照所得的mtDNA含量可能存在差异,当以单拷贝核基因ENC1和MYH6为参照时,可以计算出单个细胞中mtDNA含量,若以多拷贝基因GAPDH为参照,mtDNA含量测定值则较小。采用本方法分别对半滑舌鳎肝、肾、脾和肌肉组织的mtDNA含量进行重复性检测实验,结果表明,相同组织的mtDNA含量显示出良好的重复性(P>0.05),而不同组织中mtDNA含量具有差异性,可见该方法稳定可靠,能为海洋鱼类mtDNA含量检测提供借鉴。
关键词： 线粒体DNA含量 实时荧光定量PCR 半滑舌鳎 优化
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半滑舌鳎WT1a基因的克隆与性别分化期的表达分析
《中国水产科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：从半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)全基因组序列中获得肿瘤抑制基因WT1a的部分序列,然后利用RACE技术克隆了WT1a基因的全长,运用组织学方法,对半滑舌鳎性腺分化早期的组织切片进行了观察,并分析了该阶段WT1a的表达特征。克隆结果显示,WT1a基因cDNA全长为1 886 bp,开放阅读框(ORF)长为1 470 bp,编码490个氨基酸,并且包含KTS三肽,5′-UTR和3′-UTR分别长为245 bp和171 bp。在ORF末端发现2个微卫星(SSR)序列和2个跨膜螺旋区域,而在其他物种中未发现这些区域。氨基酸序列分析显示,WT1a基因的保守性很高,与人的同源性高达90%。通过组织切片观察发现,该批半滑舌鳎在56 d时性腺开始分化,并且卵巢分化早于精巢。荧光实时定量分析结果显示,WT1a在半滑舌鳎成鱼性腺中表达量显著高于其他各组织,在肝、肾、脾、心脏等组织中有微量表达,并且在成鱼性腺中,雄鱼表达量显著高于雌鱼,雌鱼显著高于伪雄鱼。在胚胎发育各时期以及初出膜后WT1a的表达结果显示,在12 h(原肠早期)显著升高,20 h(神经胚期)达到最高。在性腺分化早期雌雄性腺中的表达结果显示,WT1a在雌雄半滑舌鳎16~66 d的性腺中表达量持续平稳升高,在性腺分化时期表达量并没有特殊的变化。这些研究结果说明,WT1a基因是半滑舌鳎性别相关基因,并在半滑舌鳎的性腺分化、发育过程中持续表达,但可能对性腺的分化过程并不起决定作用。
关键词： 半滑舌鳎 性别相关基因 WT1a 实时荧光定量PCR
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生物絮团培养过程中养殖水体水质因子及原核与真核微生物的动态变化
《中国水产科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：在草鱼(Ctenopharyngodon idella)养殖系统中维持碳氮比为20︰1、水温(26.0±2.3)℃、pH7.2~7.8,24 h不间断供氧以形成生物絮团,监测培养过程中养殖水体总氮(TN)、总固体悬浮物(TSS)浓度、碱度的动态变化及分析生物絮团的营养组分,并应用PCR-DGGE技术研究生物絮团的原核及真核微生物组成和动态变化。养殖水体TN变化范围为6.65~11.15 mg/L,第9天达到峰值(10.11±1.05)mg/L,第12天后和第0天时的TN水平无显著性差异(P>0.05);TSS浓度在第9天达到最大值(419.67±11.5)mg/L,第15天后TSS稳定维持在244.67 mg/L;碱度变化范围为136.68~239.20 mg CaCO3/L,第6天达到峰值后逐渐下降并趋于平稳。生物絮团的粗蛋白含量为30%(干重)。生物絮团原核微生物主要由变形菌门(Proteobacterium)、放线菌门(Actinobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)和某些未知不可培养的细菌组成,蓝细菌(Cyanobacterium)只存在于生物絮团培养前期(第0、5、10天),产碱菌科细菌(Alcaligenaceae)存在于生物絮团形成的整个过程,且是第5、10、15天的优势菌。组成生物絮团的真核微生物隶属于原生动物门的斜叶虫属(Loxophyllum)、隐藻纲的隐鞭藻科(Cryptomonadaceae)及Goniomonas属、硅藻纲的双头菱形藻属(Nitzschia)。其中双头菱形藻属为絮团培养初始第0天到15天特有;斜叶虫属在絮团培养后期分布较多。结论认为,生物絮团系统在养殖的15 d左右达到稳定运行的状态,能有效调节养殖系统菌藻分布,控制养殖水质,维持整个系统的平衡与良性发展。
关键词： 生物絮团 PCR-DGGE 草鱼 原核微生物 真核微生物 总氮
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克隆牙鲆和普通牙鲆血液生理生化指标的比较
《中国水产科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：以中国水产科学研究院北戴河中心实验站养殖的双单倍体(DH)牙鲆(Paralichthys olivaceus)作为亲鱼,采用冷休克方法抑制第二极体排出,建立牙鲆克隆家系。以普通牙鲆的一个家系作为对照组,在同样饲养条件下进行培育。实验组和对照组均为2+龄鱼,克隆家系随机抽取5尾,体质量(1 398±88)g;普通群体随机抽取10尾,体质量(1 749±125)g。分别采集血液进行血液生理和生化指标的比较分析。结果表明:1)克隆牙鲆的红细胞数量(RBC)、血红蛋白数量(HGB)、平均血红蛋白量(MCH)、红细胞压积(HCT)极显著低于普通牙鲆(P<0.01),而在其他血液生理指标上二者没有显著性差异(P>0.05);2)克隆牙鲆在白球比(ALB/GLB)、谷草转氨酶/谷丙转氨酶(AST/ALT)比值、谷草转氨酶(AST)3个指标上显著高于普通牙鲆(P<0.05),其中AST差异达到极显著水平(P<0.01),而碱性磷酸酶(ALP)、总胆固醇(CHO)、尿素氮(BUN)3项指标,克隆牙鲆极显著低于普通牙鲆(P<0.01)。克隆牙鲆血液生理指标的平均变异系数为5.50%,普通牙鲆的则为9.21%,其中克隆牙鲆红细胞平均体积(MCV)的变异系数仅为1.52%。克隆牙鲆血液生化指标的变异系数平均为10.56%,普通牙鲆的则为27.23%,达到克隆牙鲆的2.58倍。结果证实,克隆牙鲆个体间的一致性较好,作为指标生物,效果优于普通牙鲆等海产鱼类。
关键词： 牙鲆 克隆家系 血液学指标 变异系数 生理生化指标
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星斑川鲽精子冷冻保存与生理特性分析
《农业生物技术学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：针对星斑川鲽(Platichthys stellatus)养殖群体中雄性个体较雌性小,产精液量低,限制了人工繁殖育苗和杂交育种开展等问题,本研究以性成熟的星斑川鲽为实验材料,对精子稀释液成分、稀释液渗透压、激活海水适宜温度和冷冻精液的适宜稀释比例等进行筛选,并用冷冻精液和鲜精分别与星斑川鲽卵进行受精和孵化实验,实验结果利用SPSS软件中单因素方差分析法和Student-Newman-Keuls进行比较分析。结果表明,利用Ts-2(37.65 g/L蔗糖+10.01 g/L KHCO3+1.21 g/L Tris碱)和SFs-4(60 g/L葡萄糖+10.01 g/L KHCO3+1.21 g/L Tris碱)冷冻保存的精子活力最高,分别为(56.67±5.78)%和(66.67±5.77)%。利用计算机辅助精子分析(computer assisted sperm analysis,CASA)系统对星斑川鲽精子进行分析,测定了用Ts-2和SFs-4保存的冷冻精液中精子运动方式的各项参数。结果显示,测定的各项参数(曲线运动速度(curvilinear velocity,VCL)、直线运动速度(straight line velocity,VSL)、平均鞭打频率(beat cross frequency,BCF)、运动的直线性(linearity,LIN)和运动的前向性(straightness,STR)表明,利用SFs-4保存的精子各项运动参数明显高于Ts-2。利用蔗糖、KHCO3和Tris碱配制不同渗透压稀释液中,在渗透压为319.94 Pa时,精子活力最高,为(61.67±5.00)%,与鲜精相比无显著差异(P>0.05)。利用3~18℃海水激活精子,结果显示,当激活海水温度在12℃时精子活力最高,与鲜精相比无显著性差异(P>0.05),而其他温度下显著低于鲜精活力(P<0.05)。将解冻后的精液稀释10~40倍,与星斑川鲽卵受精,结果显示,在稀释20倍后冷冻精液的受精率最高。本研究利用Ts-2+20%二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)和SFs-4+20%DMSO对星斑川鲽精子成功进行冷冻保存,为星斑川鲽精子冷冻保存、种质库的建立和应用提供理论和技术依据。
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绿原酸诱导凡纳滨对虾抗氧化功能及抵御低盐度胁迫的响应
《中国水产科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：选择健康、均匀,体质量为(6.74±0.08)g的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei),将360尾随机分为4组,分别投喂含有0 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg和400 mg/kg绿原酸的饲料28 d,随后将对虾从盐度为32的天然海水直接转移至盐度为10的海水中暴露72 h,测定对虾肝胰腺TAS、GPx、CAT活力和GPx、CAT基因表达水平。结果显示,在天然海水养殖条件下,绿原酸对凡纳滨对虾肝胰腺TAS、GPx活性无明显影响,但投喂含有绿原酸的饲料28d,对虾肝胰腺GPx、CAT和GPx、CAT基因表达水平显著高于D0组(P<0.05),以D2组GPx活性和GPx、CAT基因表达水平最高,分别为164.29 U/mgprot和1.61、2.14倍。低盐度胁迫24 h,D0组对虾抗氧化反应表现在TAS、GPx活性和GPx基因表达水平较28 d显著升高(P<0.05),分别增加了31.30%、27.96%和170%,而绿原酸各组对虾肝胰腺TAS、GPx活性和GPx基因表达水平显著低于D0组(P<0.05),说明绿原酸可有效缓解低盐度胁迫下对虾抗氧化系统酶活性的剧烈波动。低盐度胁迫72 h,绿原酸各组对虾肝胰腺TAS、GPx、CAT活性及CAT基因表达水平均明显高于D0组。上述结果表明绿原酸能够诱导凡纳滨对虾的抗氧化系统功能,在凡纳滨对虾抵抗低盐度胁迫中发挥着重要的作用。本研究旨为开发绿色植物提取物在对虾养殖中的应用,解决盐度胁迫对机体造成的氧化损伤提供理论依据。
关键词： 绿原酸 凡纳滨对虾 抗氧化系统功能 盐度胁迫 肝胰腺 酶活性
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