D-阿洛酮糖3-差向异构酶在大肠杆菌内的高效可溶性表达及发酵条件研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李秋凤

作者： 李秋凤;陈静;赵婧邑;韦欣;王志琦;刘继栋

作者机构：

关键词： D-阿洛酮糖3-差向异构酶;大肠杆菌;冷休克;可溶性表达;酶学性质;发酵优化

期刊名称： 食品工业科技

ISSN： 1002-0306

年卷期： 2022 年 43 卷 022 期

页码： 136-143

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 将来源于Clostridium bolteae ATCCBAA-613的DAEase基因序列经密码子优化合成,以pCold TF为表达载体,冷休克启动子CspA低温诱导DAEase基因在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中表达,得到高效可溶性的重组Cb-DAEase并利用镍柱亲和层析分离纯化.结果表明,Cb-DAEase最适pH和温度为7.0和55℃,Co2+能够显著(P<0.05)增强酶活力.对培养条件进行优化得到,在7 g/L甘油、10 g/L酵母膏、1%接种量、0.25 mmol/L IPTG、诱导前培养5 h的条件下,Cb-DAEase活力达到(10.11±0.02)U/g,比优化前(1.38±0.01)U/g提高了7.33倍;以120 g/L的D-果糖为底物全细胞催化0.5 h后,D-阿洛酮糖产量为(11.47±0.04)g/L,比优化前(1.03±0.02)g/L提高了11.14倍.基于冷休克表达策略构建的重组菌经发酵优化后Cb-DAEase活力显著(P<0.05)提高,为高效制备D-阿洛酮糖提供了理论支持.

分类号： TS201.3

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