猪繁殖与呼吸综合征阻断ELISA抗体检测方法的建立及初步应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 冯子萱

作者： 冯子萱;李宛生;张洪亮;许浒;李超;郭镇洋;彭金美;周国辉;王倩;田志军

作者机构：

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒;N蛋白;抗体;阻断ELISA

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2025 年 47 卷 006 期

页码： 585-592,613

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了建立检测猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）抗体的ELISA方法，本研究以纯化的PRRSV全病毒为包被抗原，利用PRRSV N蛋白单克隆抗体（MAb）为阻断抗体，经棋盘法优化各反应条件，建立了检测PRRSV抗体的阻断ELISA(B-ELISA)方法。结果显示，B-ELISA方法的最佳抗原包被浓度为1μg/mL，血清样品稀释度为1:4，酶标PRRSV N蛋白MAb的最佳稀释度为1:3 000。ELISA结果判定标准为血清样品抑制率PI≥40%时判定为阳性，PI<40%判定为阴性。利用该方法检测PRRSV-1、PRRSV-2、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪圆环病毒2型（PCV2）、猪瘟病毒（CSFV）、猪细小病毒（PPV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）等猪病毒阳性血清，结果显示该方法仅检测PRRSV-1和PRRSV-2为阳性，与其他病毒阳性血清均无交叉反应，特异性强。利用该方法和IDEXX试剂盒分别检测2倍倍比（1:2～1:2 048）稀释的PRRSV 71#标准阳性血清，结果显示，该方法能检测出256倍稀释的71#标准阳性血清，而IDEXX试剂盒能检测到128倍稀释的71#标准阳性血清，本实验建立的方法敏感性更高；从同一批次和不同批次包被的ELISA板中各取3块，分别检测5份猪血清样品，每份样品各重复3次，进行批内和批间重复性试验，结果显示批内重复性试验的变异系数小于10%，批间重复性试验的变异系数小于15%。利用该方法和商品化IDEXX试剂盒对黑龙江地区采集的1 012份临床血清样品进行检测，结果显示，本研究建立的B-ELISA对样品的阳性检测率为73.42%(743/1 012)，阴性率为26.58%(269/1 012),IDEXX试剂盒对样品的阳性检测率为71.84%(727/1 012)，阴性率为28.16%(285/1 012)，二者的总符合率达97.43%,Kappa值为0.957，二者检测结果高度符合。本研究建立的B-ELISA方法为PRRSV的流行病学调查及其抗体水平的监测与检测提供了新的技术手段。

分类号： S858.28

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