文献类型: 中文期刊
第一作者: 贾园
作者: 贾园;沈阳;邱亚峰;史子学;邵东华;王晓杜;邓绪芳;王皓婷;赵福广;马志永
作者机构:
关键词: 甲型;H1N1;Bac-to-Bac Baculovirus Expression System;HA
期刊名称: 中国生物工程杂志
ISSN: 1671-8135
年卷期: 2011 年 31 卷 10 期
页码: 18-22
收录情况: 北大核心 ; CSCD
摘要: 目的:利用Bac-to-Bac Baculovirus Expression System表达重组HA蛋白,Western blot及IFA方法鉴定其表达。方法:采用PCR方法扩增A/California/04/2009(H1N1)HA基因,将其克隆到pFastBacHT A载体上,重组质粒pFastBacHT-HA经双酶切及测序鉴定正确后,转化阳性重组载体进入E.coli DH10Bac感受态细胞中,通过Bluo-gal蓝白斑筛选、PCR鉴定获得重组转座子rBacmid-HA。从重组转座子中提取rBacmid-HA质粒DNA转染sf 9昆虫细胞,制备重组杆状病毒。重组杆状病毒感染sf 9细胞表达重组蛋白,Western blot及IFA鉴定重组蛋白表达情况。结论:成功构建了甲型H1N1流感病毒HA基因的昆虫杆状病毒表达载体,该表达载体转染昆虫细胞后制备的重组杆状病毒病毒滴度较高,重组杆状病毒表达的重组蛋白经Western blot及IFA鉴定后具有良好的免疫反应原性。
分类号: R373
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