不吸水链霉菌基因文库的构建及初步筛选

文献类型： 中文期刊

第一作者： 桓明辉

作者： 桓明辉;陈飞;吴红艳;关艳丽;王志;程永涛

作者机构：

关键词： 不吸水链霉菌;基因文库;地高辛探针标记;Southern杂交;菌落原位杂交

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2009 年 2009 卷 01 期

页码： 134-137

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 采用碱裂解法从不吸水链霉菌提取染色体DNA,用Sau3AI对染色体DNA进行部分水解,利用透析袋法回收3.5～9kb之间的DNA片段。以pUC18为载体,用BamHI对其进行酶切,再用热敏磷酸酶去磷酸化,酶切产物与外源DNA按一定比例混合后,加入T4DNA连接酶进行连接。连接产物用受体菌E.coliDH5α进行转化,根据α-互补性质产生的颜色反应,挑选白色菌落,构建了相应的不吸水链霉菌基因文库。分别利用特异性探针2-1-1及1-2-1对不吸水链霉菌基因文库进行筛选,利用DIG-Ⅱ-dUTP对特异性探针进行标记,与基因文库中的阳性转化子进行Southern杂交,通过显色反应对杂交结果进行检测,由于时间关系,暂未筛选出阳性克隆,但这些工作对以后的相关实验研究具有很好的借鉴作用。

分类号： TQ455.5

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