减蛋综合征病毒环介导等温扩增检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 董春娜

作者： 董春娜;李刚;李伟;张坤;史利军;哈小琴;胡永浩

作者机构：

关键词： 减蛋综合征病毒;环介导等温扩增;检测

期刊名称： 甘肃农业大学学报

ISSN： 1003-4315

年卷期： 2011 年 46 卷 02 期

页码： 1-5

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据GenBank登录的减蛋综合征病毒(EDSV)六邻体基因的保守区,设计了3对环介导等温基因扩增(LAMP)引物,优化反应体系,并对其灵敏性、特异性进行验证.结果表明:LAMP优化后的反应体系为外引物浓度0.1μmol·L-1,内引物浓度0.8μmol·L-1,环引物浓度0.4μmol·L-1,Mg2+浓度8.0 mmol·L-1,dNTP浓度0.8 mmol·L-1,甜菜碱浓度0.5 mmol·L-1,BstDNA聚合酶浓度8 U,最佳反应温度65℃;扩增出的EDSV基因呈特征性梯状条带,显色反应呈绿色荧光;检测EDSV的灵敏度高,是普通PCR检测的10倍,可检测到60个拷贝的基因组DNA;特异性强,与鸡新城疫病毒(NDV)、传染性法氏囊病毒(IBDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、鸡胚致死孤儿病毒(CELO)无交叉反应;该方法重复性好,稳定性高,可准确快速地进行减蛋综合征病毒的检测.

分类号： S852.659.1

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