木薯V型几丁质酶MeCHITVb基因克隆及其表达载体构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 丁云

作者： 丁云;陈松笔;李开绵;蔡杰

作者机构：

关键词： 木薯（Manihot esculenta Crantz）;V型几丁质酶;植物表达载体;抗寒性

期刊名称： 分子植物育种

ISSN： 1672-416X

年卷期： 2021 年 021 期

页码： 7113-7121

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 几丁质酶在生物逆境环境和非生物逆境环境中发挥着重要作用。为研究木薯几丁质酶在响应低温胁迫下的分子作用机制,利用RT-PCR技术,从木薯耐低温品种SC124中克隆到CHITVb基因,利用平末端连接技术构建pEASY-MeCHITVb克隆载体,用于测序确定目标基因序列,并对其序列进行分析,构建植物表达载体。结果表明,成功克隆木薯CHITVb基因,命名为MeCHITVb。通过生物信息学分析,该基因全长1 050 bp,编码349个氨基酸,理论相对分子量为38.08 kD,理论等电点为4.53,是一种稳定蛋白。经序列比对和系统进化树分析表明,MeCHITVb基因与烟草、拟南芥V型几丁质酶基因亲缘关系最近。用pEASYMeCHITVb与植物表达载体pISV2678构建重组子pISV-MeCHITVb,利用"Golden Gate"克隆方法构建基因编辑载体CRISPR/Cas9-MeCHITVb。将植物过表达的pISV-MeCHITVb和CRISPR/Cas9-MeCHITVb载体成功转化为根状杆菌LBA4404。本研究为后续MeCHITVb基因功能研究、木薯抗寒、抗病品种的选育及木薯北移栽培提供理论依据。

分类号： S533

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