文献类型： 中文期刊

第一作者： 金波

作者： 金波;王纪方;贾春兰;高秀云;戴正修

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期刊名称： 中国蔬菜

ISSN： 1000-6364

年卷期： 1983 年 1 卷 01 期

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摘要： 在春甘蓝(Brsslcadercea L)育种和品种选纯复壮工作中,为了获得适于春季栽培的优良植株,必须在生产田中进行选种。过去一般采用侧芽扦插的方法繁殖这些植株的后代。但近年来,由于病害日益严重,扦插成活率极低,而秋季播种,经济性状又不能得到充分表现,无法进行选择。我们采用组织培养的方法,使这一问题得到了较好的解决。 材料和方法 春甘蓝侧芽培养,一般待叶球经济性状充分表现之后,于5月下旬至6月上旬将甘蓝叶球取下,剥去层层叶片,取出带有小芽的茎盘(图1见封3。)。然后将侧芽切下,用75%的酒精进行表面消毒,再转入饱和漂白粉清液中消毒15—20分钟,用无菌水冲洗3—4次。在无菌条件下将侧芽接种在培养基上,置25—26℃,日光灯照朋10小时 (2000勒克斯左右)的条件下进行培养。 选用MS培养基,附加一定量的 IAA (@I%乙酸)和KT(激动素):,固态,液态交替使用,幼苗生长发育正常。 结果分析 一、培养苦的选择 组织培养中,培养基的选择是致关重要的。在甘蓝花茎培养(‘)和甘蓝花药培养中,我们曾对培养基和激素进行了研究,找出了适于甘蓝幼苗生长所需的种类及配比。实验证明,适于甘蓝花茎苗、花药苗生长的培养基,;也适于甘蓝侧芽苗培养,故不再作详细介绍。;。;。。由下二个很小的甘蓝侧芽,通过组织培养获得一株健壮的幼苗,需经过如下几个步骤: 1。将选好的侧芽接种在Ms+ IAAO.2毫克/升十KT 2毫克/升的固体培养基上,7～15天后侧芽的外部叶片由乳白色变为浅绿色。这段时间内,生长缓慢,展开的叶片有明显的中肋,但叶缘部分很小。2.将材料转人M6十七AAO.2毫克/升十 KT 2毫克/升的液体培养基中,经过30余天培养,株高可达8““.B厘米,展开4—5个叶片,植株生长正常。3..将液体培养基中的幼苗转入 MS十正AAQ.Zny/升(或IBAO.2毫克一叫唤丁酸)的固体培养基中,很快即有的根形成。上述三个步骤中培养基』.的蔗糖浓度均为2: %,;。PHS.8。 二、材料的选择;I.一般用茎尖加速植株繁殖时,往往采用较大的整尖组织u),这样既能提高成。活率,又能加快繁殖速度。甘蓝是幼苗春化型(‘\所以只有按时将培养的幼苗移栽田间,才能通过春化阶段。于次年正常开花结实。为此曾用带有0.5厘米见方茎盘组织的侧芽为材料进行接种,(图2见封3\i结果污染相当严重(图8见封8)见表1。。 从表1可以看出,以接种材料份数计算,污染率最高者可达93.75%。在保留下来的少数材料中,也是大部分污染,仅有很少量保留下来。从表1还可以看出,随着接种时间的后延,污染率有递增的趋势。 为解决污染问题,曾采用酒精、漂白粉、新洁尔灭等消毒液,不同浓度、不同消毒时间、不同配合方式等进行消毒实验,均未取得理想的效果。从污染情况看,除少数材料外,基本上属于同一类型污染。从上述两点分析,污染很可能是由材料带菌所致。经我所植保室同志分离鉴定得到了证实,污染是由于黑腐病菌(Xahthomonas ca“-pestris),叶斑病菌、(Pseudomonas ma-cnlicola)和软腐病菌侵染组织的结果。 2.一些实验证明,当以获得无病原体的植株为B的时,只有取用分生组织或尽可能小的茎尖,才能除去母体植株的病原体《‘)(5)。据此我们接种了不带茎盘组织的小侧芽 (图4见封3),结果见表2。 从表2可以看出,两种取材方式的污染情况差异十分显著,不带茎盘组织的侧芽,成活率高达90%以上,达到了可以使用的程度。 为进一步证实不带茎盘组织材料污染率下降的可靠性,1981年又以不同材料采用接种小芽的方式作了污染试验,结果见表3。 表8所列的14份材料中,成活率均在70%以上,不少材料的成活率可达100%,说明效果是很好的。由上述结果可以看出,一般的消毒方法只能杀死材料表面的菌类,而不能解决材料内部带菌的问题。一旦病原菌侵入植物组织,就只能从取材部位上考虑消除污染的问题。 三、幼苗生长速度问回 采取不带茎盘组织的侧芽为材料,虽然使污染问题得到了解决,但生长速度(特别是前期生长速度)显著减慢,使幼苗不能按时定植田间,影响来年正常开花结实。在植物组织培养中,影响生长速度的因素是很多的,诸如培养基成分,激素的种类和用量、培养条件、外植体的生理状态以及母株生长的环境条件等等。我们在其他条件基本相同的前提下,作了培养基的物理状态对侧芽生长速度影响的实验,取得了较好的效果,见表4。 两种培养基的成份完全相同(即Ms+IAAO.2毫克/升十 KT 2毫克/升),仅是物理状态不同,选用的侧芽也基本一致,在液体培养基中生长30天即有大部分可以转入生根培养基中(植株展开4—5个叶片,最大叶片长约2厘米,生长正常)。42天后绝大多数植株可以转人生根培养基中(图5见封3)。自转入液态培养基,到大多数植株移栽土中,仅要50多天的时间,缓苗后定植田间,生长正常(图6见封3)。固态培养基中的侧芽,在上述时间内,没有生长到可以移至生根培养基中的大小,更无幼苗可以移栽田间。 四、不同状态培并未引起侧芽生长速度差异的原因 两种培养基的化学成份完全一样,仅是物理状态不同,对甘蓝幼苗的生长何以有如此大的影响呢?为了解这一问题,设计了4种不同培养方式, I为固态MS+ IAAO.2毫克/升十 KT 2毫克/升培养基,幼苗采取一般方式直插人培养基中; 11同样为固态MS+IAAO.2毫克/升十 KT 2毫克/升培养基,但幼苗栽植时,将下部一个叶片埋入培养基中,以增大吸收面积;皿是将不加任何营养成分的琼脂做成平面,以固定幼苗,(栽植方式同1)再加入一定量的液态MS+IAAO.2毫克/升十 KTZ毫克/升培养基(注意叶片不接触溶液); IV为液态Ms+ IAA0.2毫克/升十 KTZ毫克/升培养基,幼苗采取一般方式放人,结果见表5。 从表5可以看出,I的生长速度最慢,IV的生长速度最快,见和皿介于M者之间。若把表5中的1和11.进行比较,培养基的状态和成份完全相同,只是11中有一片叶子埋入培养基中,增大了吸收营养的面积。从而看出,造成见中材料生长加快的原因,无疑是增大吸收面积的结果。而IV为液态培养基,材料放人后,会有更大的叶面积与培养基接触,所以其生长速度会更加迅速,也就是说生长速度的差异主要是吸收面积不同而造成的。 五、幼苗的移栽 幼苗转人生根培养基中(即MS+IAA0.2毫克/升),10天左右即有幼根形成,一般5—10条,多者可达数十条。待根长1一2厘米,叶4—6片时,即可移栽上中。首。先用纸折成各边长均为3.5厘米的小盒,内盛消毒过的土壤,将其密集排在特制的木盘‘中,将小苗栽人纸盒,置于光、温适宜之处,覆盖塑料薄膜,以保持湿度,待缓苗后定植田间。这种移栽方法的优点是成活率高;节省地方,便于管理。 自1979年以来,我们用侧芽培养的方法,先后培养了140多个材料,取得了比较理想的进展。1981年开始在育种工作中应用,经培养所得的植株,各种性状整齐一致 (如中心柱长短,结球性状等),获得了较好的效果。 问题讨论 一、从表5所列的数据,明显地看出液态培养基中的幼苗,增大吸收面积是提高生长速度的重要原因6.但若把I和皿作一比较,二者的吸收面积相似,但生长速度相差很大,这种差异是无法用增加吸收面积来解释的。是否由于固态培养基是一种凝胶,而离子在凝胶中的移动受到限制,速度缓慢,因而造成了培养基不同部位离子的浓淡陡度,致使植株周围营养成分局部亏缺,影响植株的生长。也可能由于离子受到凝胶的吸附,不利于植物吸收利用所造成,这是有待进一步研究的问题。 二、从马铃薯脱毒的材料看,取材大小,成活率和脱毒效果三者之间有着密切关系,即取材大,易于成活,但脱毒效果差;取材小,脱毒效果好,但成活率低。根据这种情况,取材原则应该是在能够彻底去除病毒的前提下,尽量取材大些。甘蓝侧芽培养中,污染问题虽是病毒所致,这一原则还是适用的。但由于各品种之间侧芽的生长速度不同,因而其维管束化的部位也不相同,所以取芽的大小差异很大。一般培养2—4毫产;;的侧芽能够取得较好的效果。 三、采取侧芽培养的方法,是进行春甘蓝生产田选种的有效途径,既克服了腋芽扦插法成活率低的弱点,又具备方法简便,可以获得性状一致的大量植株的优点。 四、从本实验结果看,常规的胶芽扦插法,难于成功的主要原因是材料带菌。因春甘蓝品种的侧芽适于扦插时,正是高温多雨季节,有利于各种病菌的迅速繁殖,致使材料大量发病,造成腐烂而死亡。甘蓝侧芽离体培养@金波$中国农业科学院蔬菜研究所 @王纪方$中国农业科学院蔬菜研究所 @贾春兰$中国农业科学院蔬菜研究所 @高秀云$中国农业科学院蔬菜研究所 @戴正修$中国农业科学院蔬菜研究所(1)金波等;1981:甘蓝花茎培养的研究。园艺学报, 9( 1) 53—57。 (2)中国科学院遗传研究所组织培养室、三室五组,1976;离体培养马铃薯茎顶端(或腋芽)生长点的初步研究。遗传学报, 1976( 1): 51—55。 (3)朱其杰等, 1979:结球甘蓝品种生态与杂交制种的关系。农业科技通讯,1979, 4: 19—20。 (4)森宽一,1971:用生长点培养法获得无病毒植株。植物细胞杂交参考资料第二集:53。科技出版社 (5)马铃薯生产协作组,1976:马铃薯生产的研究1,用茎类培养法生产马铃薯无毒原种。植物学报, 1976, 3。 (6)ИЯМарьяхина等,1979:结球甘蓝组织培养无性繁殖方法的研究。蔬菜译丛(一); 110—111。

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