猪囊尾蚴dUTPase基因的克隆、表达及其产物的酶学活性分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘振勇

作者： 刘振勇;吕志慧;郑亚东;窦永喜;乔军;骆学农;张艳;景志忠;才学鹏

作者机构：

关键词： dUTP焦磷酸酶;猪囊尾蚴;原核表达;酶学活性

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2010 年 43 卷 01 期

页码： 192-199

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】克隆、表达猪囊尾蚴dUTPase基因并分析其酶学活性。【方法】通过RT-PCR的方法克隆猪囊尾蚴dUTPase基因,将其与pET载体连接并在原核系统中高效表达;表达产物经Ni柱纯化后进行酶学活性测定。【结果】序列分析表明猪囊尾蚴dUTPase基因与六钩蚴的dUTPase基因核苷酸同源性为100%,而且其氨基酸序列中同样存在5个保守基序。SDS-PAGE显示在21kD附近出现与目的蛋白大小相符的特异条带,表达产物经纯化后dUTPase的含量为2.863mg·mL-1。酶学活性试验证实重组dUTPase能特异性降解dUTP,同时EDTA可以抑制dUTPase的活性;而Mg2+可以增强猪囊尾蚴dUTPase的活性。【结论】成功克隆表达了猪囊尾蚴dUTPase基因并鉴定了它的酶学活性,为进一步研究dUTPase在猪囊尾蚴中的生物学功能奠定了基础,同时也为抗猪囊尾蚴病的药物设计和开发提供了研究基础。

分类号： S852.7

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