基于DPO引物检测猪流行性腹泻病毒荧光定量RT-PCR方法的建立及初步应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王以欣

作者： 王以欣;王紫薇;汉武娇;王丽;姜艳平;崔文;周晗;乔薪瑗;唐丽杰;李一经;徐义刚

作者机构：

关键词： 猪流行性腹泻病毒;DPO引物;荧光定量RT-PCR

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2019 年 07 期

页码： 710-715

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立快速、准确检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)的方法,本研究以PEDV的N基因为靶基因,基于双启动寡核苷酸引物(DPO),经过条件优化,建立了检测PEDV的荧光定量RT-PCR方法。结果显示,DPO引物的有效退火温度范围较宽(45℃～65℃);在测试的10种病毒中仅PEDV为阳性扩增结果,其余病毒为阴性结果,特异性较强;对PEDV质粒标准品的检测限可达1.64×10~1拷贝/μL,敏感性较高;组内、组间重复性结果的变异系数均小于1%,重复性较好。利用该方法对采集的272份临床仔猪腹泻样品(粪便、小肠组织)进行检测,结果显示,共检出PEDV阳性样品39份,阳性率为14.34%,与常规RT-PCR方法检测结果的阳性符合率为92.31%;本研究建立方法检测的阳性样品经PEDV N基因测序鉴定,确实均为PEDV阳性样品。本研究建立的基于DPO引物检测PEDV的荧光定量RT-PCR方法为PEDV的准确检测和流行病学调查提供技术支持。

分类号： S852.651

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