一种载体构建的新方法:重组融合PCR法

文献类型： 中文期刊

第一作者： 欧阳平

作者： 李玉;严红;马立新

作者机构：

关键词： 重组融合PCR;载体构建;定点突变;原核表达载体

期刊名称： 基因组学与应用生物学

ISSN： 1674-568X

年卷期： 2012 年 31 卷 06 期

页码： 112-117

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究介绍一种多目的片段一步重组克隆的载体构建的新方法。该方法要求在PCR引物设计时,在第一个目的片段上游引物的5'端和最后一个目的片段下游引物的5'端各设置16bp与线性化目标载体末端同源的序列,再在各目的片段之间的引物上各设计25bp的重叠序列,以便进行融合PCR将多片段扩增成融合片段。此方法将融合片段与线性化骨架载体进行一步重组、转化和重组子鉴定。该方法只要求骨架载体上有一个特异性酶切位点,特别适用于插入片段中含有较多限制性酶切位点的载体构建;该方法还可以引入定点突变,可便捷构建分析启动子功能等需引入定点突变的载体;该构建方法还可以实现多基因的无缝融合构建多顺反子,在构建原核基因表达载体、叶绿体表达载体、线粒体表达载体方面有着明显优势。本研究以水稻胚乳特异性表达载体PGt1-mGFP-pSB130为例,介绍此载体构建方法。

分类号： Q78

  • 相关文献

[1]枣金属硫蛋白基因原核表达载体的构建. 韩彩云,曹秋芬,马青兰,孟玉平. 2009

[2]转录因子AtWRKY35序列分析及原核表达载体的构建. 伍林涛,康公平,奉斌,韩宏仕,杜才富,曾章丽,张敏琴. 2014

[3]番鸭呼肠孤病毒MW97106C蛋白基因克隆及其在E.coli中表达. 张云,欧阳岁东,刘明,胡奇林,韩周,林锋强. 2005

[4]滩羊肝脏α-TTP基因克隆及原核表达载体的构建. 贾慧娜,罗海玲,刘昆,左兆云,张玉伟,王朕朕. 2012

[5]大麦黄矮病毒运动蛋白原核表达产物抗血清的制备及体内检测. 王锡锋,周广和. 2002

[6]番木瓜环斑病毒CP基因dsRNA原核表达载体的快速构建. 陈瑶,沈文涛,言普,黎小瑛,周鹏. 2011

[7]细胞渗透肽作为抗弓形虫病疫苗传递载体的应用及免疫增强效应的研究. 王娜,张厚双,周勇志,曹杰,张守发,周金林. 2011

[8]牛凝乳酶全长cDNA的克隆及其原核表达载体的构建. 张莉,姜媛媛,张健,杨贞耐. 2010

[9]一个新的水稻种胚脂氧合酶基因OSLOX-1的克隆与功能分析. 汪仁,沈文飚,翟虎渠,万建民. 2005

[10]西尼罗病毒prM基因可溶性表达与抗原性鉴定. 赵晶,秦永丽,孙恩成,杨涛,徐青元,耿宏伟,王凌凤,蔡绪禹,魏鹏,王文世,步志高,吴东来. 2010

[11]麦二叉蚜传播体内传毒相关蛋白基因体外表达及抗血清的制备. 王锡锋,周广和. 2006

[12]细粒棘球绦虫Hsp70基因的克隆、表达及抗体制备. 赵莉. 2013

[13]微小牛蜱4D8基因原核表达及免疫原性分析. 刘军龙,关贵全,李有全,马米玲,刘爱红,任巧云,殷宏,罗建勋. 2009

[14]盐生植物盐穗木HcPS_H基因大肠杆菌表达载体的构建. 郝晓燕,张毓露,足木热木,刘小利. 2012

[15]堆形艾美耳球虫巨噬细胞移动抑制因子克隆和表达. 阎晓菲,韩红玉,黄兵,岳城,赵其平,姜连连,董辉,卞庆松,张建哲. 2009

[16]西尼罗病毒C基因可溶性表达与抗原性鉴定. 孙恩成,杨涛,徐青元,耿宏伟,王凌凤,蔡绪禹,赵晶,秦永丽,魏鹏,王文世,步志高,吴东来. 2010

[17]猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因原核表达载体的构建及序列分析. 张永富,马国文,刘月焕,刘永宏,李明刚,张秋雨,刘锋. 2008

[18]拟南芥AtCOR15a抗寒基因原核表达载体的构建及蛋白表达. 李静,李晓荣,王冬梅,郝晓燕,李建平,黄全生,张桦. 2010

[19]禽分枝杆菌副结核亚种map0862和map2154c基因的串联重组表达及其活性. 迟磊,刘思国,王春来,宫强,赵昆,刘建东,王勇,云孟克,刘慧芳,赵福广. 2008

[20]锦鲤疱疹病毒主要囊膜蛋白基因的PCR扩增与序列分析. 谭爱萍,邹为民,赵飞,姜兰,陈信廉,劳海华,简清,陆小萏,罗理. 2008

作者其他论文 更多>>

微信小程序