盐胁迫下大麦酵母双杂交文库的构建与鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李颖波

作者： 李颖波;宗营杰;刘成洪;陆瑞菊;黄剑华;杜志钊;许建华;王亦菲

作者机构：

关键词： 盐胁迫;大麦;酵母双杂交;cDNA文库

期刊名称： 上海农业学报

ISSN： 1000-3924

年卷期： 2019 年 06 期

页码： 1-5

摘要： 为研究盐胁迫下大麦耐盐相关蛋白的互作蛋白,利用Gateway技术构建盐胁迫下大麦的酵母双杂交文库。首先提取受盐胁迫的大麦总RNA,分离mRNA并合成双链cDNA,并通过位点特异重组系统(BP重组)将双链cDNA转入pDONR22载体,构建初级文库。然后,将初级文库质粒通过同源重组转入pGADT7-DEST载体,构建次级文库。最后,将次级文库质粒转入酵母菌株Y187中构建酵母双杂交文库。经鉴定,该酵母双杂交文库的滴度为7.0×10~7 CFU/mL,插入cDNA片段平均长度大于1 000 bp,重组率大于95.8%。所构建的酵母双杂交文库质量较高,可用于后续的互作蛋白筛选工作。

分类号： S512.3

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