抗氯霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选及ciELISA试剂盒的研制

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王自良

作者： 王自良;张海棠;王艳荣;崔艳红;邓瑞广;朱超;张改平

作者机构：

关键词： 氯霉素;人工免疫原;单克隆抗体;ciELISA试剂盒

期刊名称： 河南农业大学学报

ISSN： 1000-2340

年卷期： 2008 年 42 卷 01 期

页码： 67-72

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 将氯霉素(CAP)化学修饰引入羧基活性基团,形成具有半抗原结构特征的氯霉素半琥珀酸酯(CAP-HS),用混合酸酐法制备免疫原BSA-CAP-HS和包被原OVA-CAP-HS,用UV,SDS-PAGE进行鉴定;BSA-CAP-HS免疫BALB/C小鼠,细胞融合技术筛选抗氯霉素单克隆抗体(CAP mAb)杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备CAPmAb,并鉴定其免疫学特性;应用CAP mAb研制CAP残留快速检测ciELISA试剂盒(CAP-Kit),并测定其性能.结果表明,BSA-CAP-HS偶联成功,分子结合比为1∶15.6;筛选出3株杂交瘤,其中最好的4F9株间接ELISA效价细胞上清为1∶1.28×103,腹水为1∶6.4×105,亲和常数(Ka)为1.84×1010L.mol-1,半数抑制浓度(IC50)为2.4μg.L-1,与氯霉素琥珀酸钠的交叉反应(CR)为150%,与其它酰胺醇类和抗菌素药物无交叉反应;CAP-Kit的标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,线性范围为0.1~128μg.L-1,灵敏度为0.053μg.L-1,检测限为0.1μg.L-1,奶样、肉样的平均添加回收率为88.5%,82.7%,平均批内和批间变异系数<15%.CAP-Kit在4℃可保存180 d.

分类号： S859.84

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