肠炎沙门氏菌EMA-PCR检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 颜成英

作者： 颜成英;汤晓艳;王敏;康大成;李朋颖;郑锌

作者机构：

关键词： 叠氮溴乙锭;聚合酶链式反应;肠炎沙门氏菌

期刊名称： 食品科学

ISSN： 1002-6630

年卷期： 2014 年 35 卷 06 期

页码： 90-93

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 将荧光染料叠氮溴化乙锭(ethidium monoazide,EMA)与聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测技术相结合,用于肠炎沙门氏菌活菌的检测。实验参数优化结果表明,当EMA终质量浓度50μg/mL、曝光时间10 min时,可以抑制约107 CFU/mL肠炎沙门氏菌死菌DNA的扩增;活菌灵敏度检测结果显示,EMA-PCR方法检测限与单一PCR方法一样均为27.5 CFU/mL,说明EMA处理既不会影响活菌DNA的扩增也不会影响PCR方法的灵敏度。利用EMA-PCR方法检测死活混合菌液时发现,添加EMA的实验组DNA条带亮度会随着活菌比例的降低而变暗,且当样品中全是死菌时,没有目标条带出现;而不添加EMA的对照组DNA条带亮度没有变化,当样品中全是死菌时,目标条带依然清晰可见。说明添加EMA可以达到区分死活菌的目的,EMA-PCR方法只检测样品中的活菌,避免了死菌DNA造成假阳性的可能性。

分类号： TS207.4

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