海蓬子盐胁迫初期抑制消减杂交cDNA文库的构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张大栋

作者： 张大栋;马鸿翔;吉晓佳;周春霖;王茂文;汤日圣;杨永华

作者机构：

关键词： 盐生植物海蓬子;抑制消减抑制杂交;cDNA文库;RNA分离

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2006 年 22 卷 02 期

页码： 113-116

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为提高缩叶肉质盐生植物海蓬子总RNA和mRNA的质量,将改良CTAB法与Tripure试剂盒方法相结合,从300 mg海蓬子发芽后20 d的幼苗中成功分离和纯化了高纯度的总RNA和mRNA。并以无NaC l处理为D river,以200 mmol/L NaC l处理24 h、48 h、72 h的幼苗为Tester,通过cDNA双链的合成及两次PCR扩增,富集到两组处理中差异表达的大小在200~1 300 bp的cDNA序列,pGEM-T的连接和蓝白斑筛选表明杂交文库滴度和重组率分别达到2.6×107和96%,共收集阳性克隆12 000个,形成了抑制消减杂交的质粒cDNA文库。随机挑取酶切质粒的电泳分析表明,载体中均有插入片段。两种RNA提取方法的结合有效提高了多汁多色素海蓬子RNA的质量,高效抑制消减杂交文库的建立为进一步分析基因的差异表达及分离抗盐基因奠定了基础。

分类号： Q943.2

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