口蹄疫病毒3D蛋白在体外的表达纯化及二级结构分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 韩雪清

作者： 韩雪清;刘湘涛;林祥梅;尹双辉;尚佑军;刘健;梅林

作者机构：

关键词： 口蹄疫病毒;3D蛋白;表达纯化;CD分析

期刊名称： 微生物学杂志

ISSN： 1005-7021

年卷期： 2005 年 25 卷 05 期

页码： 6-10

收录情况： CSCD

摘要： 口蹄疫(FMD)是严重影响全球农业经济的高度传染的毁灭性的疫病。3D蛋白是口蹄疫病毒(FMDV)编码的RNA聚合酶,参与病毒RNA的复制。利用PCR扩增得到了FMDV的3D基因片段,然后将其克隆到原核表达质粒pET-28a(+)上,构建重组表达质粒pETFM3D。转化宿主菌BL21(DE3)后,利用1 mmol/L的IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,得到了稳定、过量表达的可溶性的3D蛋白质。目的蛋白质经NI亲和层析柱一步纯化就达到95%,再经Q-sepharose柱纯化后达到97%。通过圆二(CD)色谱测定和计算3D蛋白质在不同的pH(2、4、6、8和10)和不同的温度下(25~85℃)的二级结构。上述结果表明,表达的可溶性3D蛋白质具有高表达、易纯化和稳定性好等特点。

分类号： S852.65

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