小反刍兽疫病毒Nigeria75/1株磷蛋白的表达及磷酸化位点的预测

文献类型： 中文期刊

第一作者： 金红岩

作者： 金红岩;封家旺;李文超;程朝飞;隋修锟

作者机构：

关键词： P蛋白;小反刍兽疫病毒;原核表达;磷酸化位点

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2013 年 12 期

页码： 1252-1256

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为深入研究小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)P蛋白对病毒复制的影响,以小反刍兽疫病毒Nigeria75/1株为研究对象,通过RT-PCR法扩增P基因,将扩增出的P基因克隆到pGEX-6P-1原核表达载体中,成功构建pGEX-6P-1-PPRV-P表达载体,测序鉴定无误后转化至表达宿主菌BL21(DE3)plysS中进行IPTG诱导表达,并通过在线软件预测了P蛋白的磷酸化位点。结果显示,pGEX-6P-1-PPRV-P重组菌在IPTG浓度1.0mmol/L时经37℃诱导4h,目的基因可正确表达,并以可溶性的形式存在。经Western-blot鉴定,目的蛋白可与PPRV Nigeria75/1株病毒小鼠阳性血清发生特异性的免疫印迹反应,证明表达的蛋白具有较好的反应原性。经综合预测分析,可能被磷酸化的位点有46个,其中PKC、PKA、CKII/CKI、cdc2可能作用的位点分别为15个、7个、10个、6个,其他激酶作用位点可能为8个。结果表明,P蛋白的克隆表达及磷酸化位点的成功预测为小反刍兽疫病毒的深入研究奠定了基础。

分类号： S852.65

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