小反刍兽疫病毒N基因重组杆状病毒的构建及间接ELISA抗体检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李伟

作者： 李伟;李刚;吴晓东;邱文英;张坤;Hermann Unger

作者机构：

关键词： 小反刍兽疫病毒;杆状病毒;昆虫细胞;间接ELISA

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2010 年 41 卷 09 期

页码： 1147-1153

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究旨在建立基于真核表达的小反刍兽疫病毒(PPRV)N蛋白的诊断小反刍兽疫的间接ELISA方法。利用Bac-to-Bac杆状病毒-昆虫表达系统,构建含有PPRV N基因的重组供体质粒pFastBacHTA-N,转化E.coliDH10Bac感受态细胞,得到重组穿梭质粒pBacmid-PPRV-V,转染昆虫细胞Sf21,获得含有PPRV N基因的重组杆状病毒。用重组病毒感染昆虫细胞后,SDS-PAGE鉴定出60ku左右的表达蛋白,Western blot检测该蛋白具有很好的反应原性。以重组Bacmid-PPRV-N蛋白作为包被抗原,建立间接ELISA检测方法。临床检测来自西藏疫区的37份山羊血清和来自青海省非疫区的92份山羊血清,与法国蒙彼利埃农学发展研究国际合作中心(CIRAD-EMVT)提供的竞争ELISA试剂盒相比较,特异性为96.2%,敏感性为100%,二者的符合率达到96.9%。结果表明本研究建立的间接ELISA方法可以很好地用于小反刍兽疫的临床诊断。

分类号： S852.659.5

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