含有鸡体偏嗜性密码子的H5亚型禽流感病毒HA基因的优化构建及其DNA疫苗体外瞬时表达研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 姜永萍

作者： 姜永萍;李呈军;张洪波;步志高;张芳芳;邓国华;于康震;陈化兰

作者机构：

关键词： HA基因;密码子优化;重叠延伸PCR;间接免疫荧光;Westernblot检测

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2005 年 27 卷 06 期

页码：

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 不同物种间细胞在蛋白翻译过程中具有密码子使用的偏嗜性,鸡与A型流感病毒的密码子使用频率存在着明显差异。为此,利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR及限制酶切法构建了密码子优化的表达A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]HA蛋白的基因optiHA5,并将其插入CMV启动子表达载体pCI构建了H5亚型DNA疫苗质粒pCIoptiHA5,将含有GD/1/96(H5N1)野生型HA基因的质粒pCIHA5和pCIoptiHA5分别转染293T细胞,间接免疫荧光检测转染后24~48 h 293T细胞中瞬时表达的HA抗原蛋白;Westernblot证实上述2种表达质粒均可正确表达H5亚型HA抗原蛋白,结果表明密码子优化的基因optiHA5体外瞬时表达水平显著高于野生型HA基因。这一结果为进一步开展SPF鸡免疫保护效果的比较研究奠定了基础。

分类号： S852.65

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