猪TLR7基因胞外区部分片段的克隆、表达及其重组蛋白的纯化分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 和燕玲

作者： 和燕玲;房永祥;陈国华;刘磊;景志忠

作者机构：

关键词： 猪TLR7胞外区片段;重组蛋白;抗原性

期刊名称： 安徽农业科学

ISSN： 0517-6611

年卷期： 2009 年 37 卷 24 期

页码： 11450-11452+11463

收录情况： 北大核心

摘要： [目的]获得高表达量的蛋白,为进一步研制单克隆抗体提供较好的免疫原,同时也可为TLR7胞外区该片断蛋白未知区域的结构和功能研究奠定基础。[方法]应用PCR技术从重组质粒pcDNA3.1/CT-GFP-pTLR7上扩增出编码猪TLR7基因胞外区N端第27～202位氨基酸序列,利用BamHⅠ和HindⅢ酶切位点将其插入到原核表达载体PET30a中,重组质粒转化BL21(DE3)后,在不同条件下诱导表达。[结果]经SDS-PAGE分析表明,重组菌表达出约26 kD的融合蛋白,并证实主要以包涵体形式表达,其最佳诱导表达条件是37℃、0.5 mmol/LIPTG诱导6 h,表达量可接近50%;纯化的重组蛋白免疫小鼠后,间接ELISA检测抗体效价,结果该蛋白免疫BALB/c小鼠效价达105。[结论]TLR7胞外区该片断重组蛋白具有很好的抗原性,可以作为单克隆抗体研制的免疫原。

分类号： S828

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