山羊副流感病毒3型N蛋白原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王咪

作者： 王咪;李文良;郝飞;毛立;杨蕾蕾

作者机构：

关键词： 山羊副流感病毒3型;N蛋白;原核表达;间接ELISA

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2017 年 48 卷 01 期

页码： 150-156

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 山羊副流感病毒3型可引起山羊呼吸道疾病,与支原体、细菌等混合感染引起广泛的发病与死亡,笔者拟通过建立基于N蛋白的间接ELISA抗体检测方法用于该病的监测。设计引物扩增目的基因N,克隆到质粒pET32a(+)上,构建重组质粒pET32a-N,并转化至大肠杆菌BL21中,IPTG诱导表达重组N蛋白并鉴定。通过条件优化建立ELISA抗体检测方法,并检测临床样品与HI试验进行比较。本试验成功构建重组质粒,诱导表达的蛋白质(47ku)经SDS-PAGE与Western blot鉴定,证明其正确表达且具有良好的抗原性与特异性。利用纯化的蛋白质作为包被抗原优化间接ELISA反应条件,确定其最佳抗原包被浓度为1μg·mL-1、血清稀释度为1∶200、血清作用时间60min、酶标二抗工作浓度为1∶6 000、二抗反应时间30min、底物显色时间10min。通过对138份临床血清样品检测发现其与HI试验结果符合率达88.41%。本研究建立的间接ELISA检测方法敏感、特异、准确,适用于临床样品的检测与血清流行病学调查。

分类号： S852.654

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