化学合成小干扰RNA分子高效抑制草鱼呼肠孤病毒复制

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李兵

作者： 李兵;范玉顶;李艳秋;徐进;周勇;曾令兵

作者机构：

关键词： 草鱼呼肠孤病毒;RNA干扰;复制;抑制

期刊名称： 病毒学报

ISSN： 1000-8721

年卷期： 2009 年 05 期

页码： 66-72

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 采用化学合成法分别合成靶向草鱼呼肠孤病毒(GCRV)RNA基因组节段L2片段上的RNA聚合酶基因(RdRp)和S4片段上的外衣壳蛋白基因(OCP)的小干扰RNA分子siRNA-RdRp1 286、siRNA-RdRp1 441和siRNA-OCP117,脂质体转染法转染草鱼肾脏组织细胞系CIK。转染6 h后用草鱼呼肠孤病毒感染细胞,48 h后收集感染细胞的培养液,微量培养法测定病毒lgTCID50/0.1mL值。以细胞管家基因-βactin mRNA水平为参照,RT-PCR法检测呼肠孤病毒siRNAs靶基因的mRNA水平。病毒滴度测定结果表明:转染siRNA-RdRp1 286、siRNA-RdRp1 441和siRNA-OCP117三种siRNAs的病毒滴度lgTCID50/0.1 mL分别为4.41±0.16、3.83±0.44和1.94±0.42,极显著低于阳性感染对照组的病毒滴度(7.92±0.52,P<0.01),转染siRNA阴性对照组的病毒滴度无明显变化(7.50±0.17,P>0.05)。RT-PCR检测结果显示:与阳性感染对照组比较,转染siRNA-RdRp1286、siRNA-RdRp1 441和siRNA-OCP117后的CIK细胞中GCRV mRNA水平显著下降,抑制率分别为82.08±2.15%、89.19±1.14%和92.62±0.17%,而转染阴性对照组对GCRV mRNA水平没有显著的影响(P>0.05)。

分类号： S941

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