猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株ORF6基因的克隆与原核表达研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘永宏

作者： 刘永宏;刘月焕;王凤龙;韩春华;林健;王金玲;杨龙峰;赵丽;张秋雨;张永富

作者机构：

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒;变异株;ORF6基因;克隆;原核表达

期刊名称： 中国动物检疫

ISSN： 1005-944X

年卷期： 2009 年 26 卷 07 期

页码： 29-32

摘要： 根据GenBank中美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF6基因序列,设计合成一对特异性引物,应用RT-PCR方法扩增出PRRSV的ORF6基因(M基因)。将所扩增片段克隆入原核表达载体pET-32a(+),pET-ORF6重组质粒转化DH5a宿主菌后,经双酶切、PCR鉴定后挑选阳性克隆测序鉴定并对插入的ORF6基因序列进行分析。结果表明,ORF6基因的原核表达载体构建成功。ORF6基因推导的氨基酸与美洲型相应基因的同源性为96.0%～100%,与LV株的同源性为79.9%,系统进化树表明该PRRSV属于美洲型。将构建成功的重组质粒pET-ORF6转化BL21,诱导后经SDS-PAGE和Western-blot分析表明:克隆在HIS标签的膜基质蛋白基因与HIS获得了高效表达,表达的融合蛋白HIS-M分子量约为39kDa,并且有免疫学反应活性。

分类号： S852.659.6

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