应用SSA报告载体提高ZFN和CRISPR/Cas9对猪IGF2基因的打靶效率

文献类型： 中文期刊

第一作者： 吴金青

作者： 吴金青;梅瑰;刘志国;陈瑶生;丛佩清

作者机构：

关键词： IGF2基因;ZFN;CRISPR/Cas9;SSA报告系统

期刊名称： 遗传

ISSN： 0253-9772

年卷期： 2015 年 37 卷 01 期

页码： 55-62

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： IGF2(Insulin-like growth factor 2)基因作为最复杂多样的生长因子之一,对猪胎儿发育以及出生后生长发育和肌肉生成起着非常重要的作用。通过基因组编辑技术对我国本地猪种的IGF2基因作精确的遗传修饰,对于提高本地猪种的瘦肉率具有重要的育种意义。文章在蓝塘猪胎儿成纤维细胞(Porcine fetal fibroblasts,PEF)中检测了锌指核酸酶(Zinc finger nucleases,ZFN)和CRISPR/Cas9对IGF2基因的打靶效率,结果表明CRISPR/Cas9对IGF2基因的切割效率最高可达9.2%,显著高于ZFN的切割效率(<1%),但两者均未达到作为体细胞核移植(Somatic nuclear transfer,SCNT)供体细胞所需的打靶效率。应用SSA(Single-strand annealing)报告载体筛选技术来富集IGF2基因被ZFN和CRISPR/Cas9修饰过的PEF细胞,结果表明,该技术可使CRISPR/Cas9的打靶效率提高5倍左右,对ZFN的打靶效率具有更大的增强作用。

分类号： S828

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