原核表达、稀释复性的人FCγR Ⅱ A恢复IGG的结合功能

文献类型： 中文期刊

第一作者： 席俊

作者： 席俊;张改平;张利娜;苗现伟;乔松林;张红;何礼洋;游雷鸣;郑彦君

作者机构：

关键词： SHURⅡ蛋白;原核表达;复性

期刊名称： 中华微生物学和免疫学杂志

ISSN： 0254-5101

年卷期： 2008 年 28 卷 012 期

页码： 1059-1063

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的 探讨原核表达稀释复性的可溶性人FCγR Ⅱ A(SHUFCγRⅡA)的胞外区蛋白在体外与配体的结合活性.方法 应用PCR技术从重组质粒PC3HUR Ⅱ中扩增HUFCγR Ⅱ A的胞外区基因,将其克隆于原核表达载体PET-28A中.所构建的重组质粒经PCR和酶切鉴定后转化大肠杆菌B121(DE3),IPTG诱导表达,制备融合蛋白包涵体.并采用多次洗涤法分离和纯化包涵体,用稀释法对纯化后的目的 蛋白进行复性,ELISA和流式细胞术测定重组SHURⅡ在体外与配体的结合活性.结果 扩增到了HUFCγRⅡA的胞外区基因,所构建的PETSHURⅡ重组质粒经PCR和酶切鉴定与设计序列一致.转化BL21(DE3)后,IPTG诱导目的 蛋白表达率约为30%.SDS-PAGE初步测定目的 蛋白的相对分子质量(MR)约为24.8*103,与理论预期值一致.破菌后电泳证实目的 蛋白主要以包涵体形式表达,经多次洗涤后蛋白纯度大于90%.ELISA法测得重组SHURⅡ与人IGG在体外有良好的结合活性,流式细胞术测得重组SHURⅡ对配体与受体结合有抑制作用.结论 本复性方法可得到和天然蛋白类似生物学活性的目的 蛋白.

分类号： R3

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